Oxoid藥敏紙片使用說(shuō)明書(shū)

Oxoid藥敏紙片使用說(shuō)明書(shū)
用途：Oxiod藥敏紙片用于半定量瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行體外敏感性檢測(cè)。小結(jié)和解釋：將浸透有規(guī)定濃度的抗微生物藥物的濾紙片放置在適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)培養(yǎng)基表面，以此確定能在體內(nèi)使用的合適藥物。
操作原理：將臨床分離株的純培養(yǎng)物接種到試驗(yàn)培養(yǎng)基上�？股�素通過(guò)瓊脂擴(kuò)散，形成濃度梯度。培養(yǎng)后，測(cè)量紙片周圍的抑菌環(huán)，并與經(jīng)測(cè)試的特定抗微生物藥物公認(rèn)的抑菌環(huán)大小比較。
試劑：Oxoid藥敏紙片為6mm的濾紙片，兩面都印有字母代碼，標(biāo)識(shí)抗微生物藥物和濃度。Oxoid藥敏紙片為筒裝，每筒50片。每包里面裝有5筒紙片。紙片筒采用獨(dú)立的箔密封泡罩包裝，內(nèi)有干燥劑。
注意事項(xiàng)：僅供體外診斷使用。遵守使用說(shuō)明。整個(gè)操作過(guò)程中都要采用無(wú)菌技術(shù)并遵守針對(duì)所有微生物危害建立的預(yù)防措施的規(guī)定。按照生物危害廢棄物操作和處理指南的指導(dǎo)，必須對(duì)使用后的培養(yǎng)物、容器和其它被污染的物質(zhì)進(jìn)行滅菌。不得使用超過(guò)失效期的產(chǎn)品。一旦紙筒被打開(kāi)，要保證將其保存在不透明的干燥環(huán)境中，防止抗生素降解。如果紙片沒(méi)有對(duì)推薦的對(duì)照微生物產(chǎn)生預(yù)期大小的抑菌環(huán)，檢查整個(gè)操作流程。
儲(chǔ)存指導(dǎo)：未開(kāi)封的紙筒在使用前必須儲(chǔ)存在-20℃到8℃。未開(kāi)封的紙筒在從包裝中拿出來(lái)之前，應(yīng)放到室溫下，以便將冷凝水降到最低，因?yàn)槔淠�水�?huì)降低抗微生物藥物的效力。只有對(duì)保存在適當(dāng)條件下未開(kāi)封的泡罩包裝，失效日期才有效。一旦紙筒被打開(kāi)，就需要與分配器裝在所提供的容器內(nèi)保存（請(qǐng)保證裝入了干燥劑），或者其它適合的裝入干燥劑的不透明氣密容器中，防止紙片受潮。分配器裝入保存容器中于冰箱內(nèi)儲(chǔ)存，在打開(kāi)前放到室溫下，防止發(fā)生冷凝。一旦打開(kāi)紙筒，建議紙筒儲(chǔ)存不得超過(guò)7天。
標(biāo)本：供試微生物應(yīng)是從培養(yǎng)基中挑取的新鮮的、純的臨床分離株。如有可能，標(biāo)本應(yīng)在開(kāi)始抗微生物治療前，就從患者處采集。
 
操作流程：
提供的材料：Oxoid藥敏紙片。
需要但沒(méi)有提供的材料：用適當(dāng)培養(yǎng)基制成的瓊脂平板、接種用的混懸培養(yǎng)基、無(wú)菌接種環(huán)和拭子、無(wú)菌鑷子、麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)液、培養(yǎng)箱、改良的氣體環(huán)境、抗生素紙片分配器、質(zhì)控菌種、測(cè)量抑菌環(huán)大小的裝置和當(dāng)?shù)貥?biāo)準(zhǔn)方法的判讀標(biāo)準(zhǔn)。
方法：Oxoid藥敏紙片可能會(huì)與各種標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法一起使用，包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST，請(qǐng)參見(jiàn)現(xiàn)行的當(dāng)?shù)刂改�，查找特定信息，如推薦的培養(yǎng)基、接種物濃度水平和培養(yǎng)條件等。
質(zhì)控程序：建議以適當(dāng)?shù)拈g隔檢測(cè)質(zhì)控菌株，可以在每次做試驗(yàn)時(shí)進(jìn)行，也可以根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)機(jī)構(gòu)提供的抗生素敏感性檢測(cè)指南推薦的程序。如果質(zhì)控微生物對(duì)特定抗生素的檢查結(jié)果在規(guī)定的范圍以外，不得報(bào)告患者的檢查結(jié)果，并不得使用該藥敏紙片，直至確定了產(chǎn)生這種不一致結(jié)果的原因（例如培養(yǎng)基、灌裝量、接種物、培養(yǎng)條件、質(zhì)控菌株或者藥敏紙片儲(chǔ)存或使用不正確）。
限制：本產(chǎn)品供體外診斷使用，僅用于指示供試微生物的體內(nèi)敏感性。選擇何種抗微生物藥物進(jìn)行測(cè)試和報(bào)告必須由每個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室來(lái)決定。臨床醫(yī)生負(fù)責(zé)決定使用何種抗生素對(duì)抗供試微生物，同時(shí)應(yīng)考慮可能影響藥物體內(nèi)活性的其它因素。
臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）方法小結(jié)（其它標(biāo)準(zhǔn)有所不同）：培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂用于檢測(cè)非苛養(yǎng)微生物。Mueller-Hinton加5%綿羊血用于檢測(cè)腦膜炎奈瑟氏菌和鏈球菌，GC瓊脂加1%規(guī)定的生長(zhǎng)添加劑用于檢測(cè)淋病奈瑟氏菌。嗜血桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基用于檢測(cè)流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其它苛養(yǎng)菌或很少檢測(cè)的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基和檢測(cè)條件可在CLSI M45中找到。平板和藥敏紙片在使用前要在室溫下平衡。平板在接種細(xì)菌前不應(yīng)太潮濕。
供試微生物：采取適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法來(lái)核實(shí)供試微生物的推測(cè)鑒定結(jié)果。采用直接菌落法或生長(zhǎng)法制備標(biāo)準(zhǔn)化的接種物并在制備好的15分鐘內(nèi)接種到平板上：生長(zhǎng)法－用接種環(huán)蘸取3至5個(gè)形態(tài)上相似的菌落，并將其轉(zhuǎn)移到4-5 ml的胰蛋白胨大豆肉湯或
類似培養(yǎng)基中。在35℃下培養(yǎng)2-6小時(shí)。用無(wú)菌鹽水或肉湯調(diào)整濁度，使?jié)岫鹊扔?.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)（制備0.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)液：將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl₂ ·2H₂O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中－將這一標(biāo)準(zhǔn)液置于暗處）。直接菌落法（葡萄球菌和鏈球菌的首選方法）－從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落，加入無(wú)菌鹽水或肉湯中，并制成等于0.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)的菌懸液。
接種：將無(wú)菌拭子浸入菌懸液中，對(duì)著試管壁旋轉(zhuǎn)按壓，擠出多余的液體。沿著至少三個(gè)方向涂布平板表面。應(yīng)在接種的15分鐘內(nèi)將藥敏紙片放到平板上。
藥敏紙片：使用前要將藥敏紙片放置于室溫下。每塊平板推薦的試驗(yàn)藥敏紙片數(shù)量如下：

微生物：	每塊平板推薦的藥敏紙片：
淋病奈瑟氏菌，副流感嗜血桿菌，流感嗜血桿菌和鏈球菌	140-150 mm的平板上要9張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要4張藥敏紙片
腦膜炎奈瑟氏菌	140-150 mm的平板上要5張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要2張藥敏紙片
非苛養(yǎng)菌	140-150 mm的平板上要12張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要5張藥敏紙片

在貼上藥敏紙片的15分鐘內(nèi)翻轉(zhuǎn)平板，并按照下面的規(guī)定培養(yǎng)

微生物：	培養(yǎng)要求：
流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌	5% CO2，35±2℃，16-18小時(shí)
淋病奈瑟氏菌	5% CO2，36±1℃，20-24小時(shí)
腦膜炎奈瑟氏菌	5% CO2，35±2℃，20-24小時(shí)
非苛養(yǎng)菌*	需氧，35±2℃，16-18小時(shí)
鏈球菌	5% CO2，35±2℃，20-24小時(shí)

*葡萄球菌和腸球菌需要培養(yǎng)24小時(shí)。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在溫度超過(guò)35℃的條件下檢測(cè)不出來(lái)。
判讀：培養(yǎng)后，測(cè)量細(xì)菌生長(zhǎng)完全抑制區(qū)域的直徑，精確到mm。抑菌環(huán)的邊緣應(yīng)為肉眼可以發(fā)現(xiàn)的無(wú)明顯微生物生長(zhǎng)的區(qū)域。血平板的結(jié)果利用反射光從平板的上表面讀�。ú挥米x取溶血環(huán)的邊緣，而是細(xì)菌生長(zhǎng)的邊緣）。所有其它培養(yǎng)基要使用黑色背景和反射光從平板的背面判讀（葡萄球菌和腸球菌除外，它們采用投射光讀�。�有微弱的生長(zhǎng)表明有耐藥性）。如果是變形桿菌，忽略在明顯的抑菌環(huán)上生長(zhǎng)的一層薄薄菌膜。對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀的完整說(shuō)明可依照CLSI方法，請(qǐng)參考現(xiàn)行的CLSI M100標(biāo)準(zhǔn)。下表只詳細(xì)說(shuō)明了在CLSI標(biāo)準(zhǔn)中的那些藥物/濃度。與其它標(biāo)準(zhǔn)方法一起使用的其它藥物和濃度可從Oxoid獲得，但沒(méi)有在本說(shuō)明書(shū)中詳細(xì)列出。
*部分摘自CLSI文件M100-S20（M02-A10）：“藥敏紙片擴(kuò)散法補(bǔ)充表”抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)性能標(biāo)準(zhǔn)。可從臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807）獲得完整的標(biāo)準(zhǔn)。