Western Blot實(shí)驗(yàn)中封閉液的選擇

封閉是Western Blot 至關(guān)重要的一部分， 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結(jié)合，為成功的WB奠定基礎(chǔ)。雖然這個(gè)步驟操作簡單，但是封閉液的選擇確是很多科研人員的難題。為了讓大家更方便的選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的封閉液，這里給大家介紹6種不同的封閉液，以及它們的優(yōu)缺點(diǎn)。

1、脫脂奶粉
最好買的封閉劑就屬脫脂奶粉了。無論是從化學(xué)制品公司還是從超市購買，都可以直接拿來使用。通常封閉液的濃度為 2.5-5% （w/v）。但值得注意的是，脫脂奶粉是許多種蛋白質(zhì)的混合物，其中含有酪蛋白，是一種磷蛋白。如果你的目標(biāo)蛋白是磷蛋白的話，千萬不要選擇脫脂奶粉，否則會(huì)有很多背景信號(hào)。即使你的目標(biāo)蛋白不是磷蛋白，因?yàn)槭堑鞍踪|(zhì)的混合物，所以也容易產(chǎn)生較高的背景信號(hào)。

2、牛血清白蛋白(BSA)
牛血清白蛋白是從牛血清中提純之后的一種球蛋白，是除了脫脂奶粉之外，非常常用的封閉劑。通常含有BSA的封閉液的濃度為2-5%（w/v）。但大家也可 以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)的需要來改變濃度，因?yàn)閮r(jià)格比較高，所以很多研究人員都是用盡可能低而有效的濃度。雖然BSA不是磷蛋白而且是單一蛋白，但是提純過程中有 可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物，這些蛋白都可以和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，會(huì)增加非特異性背景信號(hào) 。

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3、全血清
全血清是許多蛋白質(zhì)的混合物，例如胎牛血清、兔血清、山羊血清等，同樣可以被用來當(dāng)做封閉劑。大家對(duì)它的使用率很低，因?yàn)楦�脫脂奶粉和BSA相比，并沒有什么突出的好處，但價(jià)格卻更貴。通常使用的濃度為 5-10%（w/v）。像BSA一樣，它含有免疫球蛋白和血清蛋白，會(huì)和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。

4、魚膠
用魚膠當(dāng)封閉液是從豬皮膠演變而來的。魚膠是從冷水魚的皮膚中提取出來的，即使在溫度較低的情況下也會(huì)不會(huì)凝固。通常使用的濃度為0.1-5% （w/v）。不像脫脂奶粉和BSA，它不含有任何的血清蛋白，所以就不會(huì)和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，大大降低了背景信號(hào)。但是魚膠不能用來封閉生物素- 抗生物素抗體蛋白系統(tǒng)，因?yàn)樗�含有�?nèi)源性生物素。

5、PVP（polyvinyl pyrrolidone）
PVP 是傳統(tǒng)封閉液的非蛋白質(zhì)性質(zhì)的替代品。雖然早在1993年就有文獻(xiàn)發(fā)表，在封閉技術(shù)上卻是很新的產(chǎn)品。PVP是一種水溶性多聚物，可以很快和硝酸纖維素和PVDF膜結(jié)合。通常使用的濃度在0.5-2%（w/v），而且通常會(huì)和其他封閉劑一起使用。PVP 在用于檢測較小目標(biāo)蛋白的時(shí)候非常有效。

6、商品化封閉液
商品化封閉液通常含有提純過的蛋白，用這個(gè)封閉液的好處就是你可以確定里面不含有磷蛋白、免疫球蛋白、白蛋白、生物素 等其他封閉液中難以避免的成分。當(dāng)然，價(jià)格也就更貴。每個(gè)商品化封閉液都有自己的Protocol，基本照做就沒問題，而且封閉時(shí)間很快。

相信大家現(xiàn)在對(duì)各種封閉液都有了更全面的了解。總的來說，封閉液的選擇基于三樣事情：抗體、目標(biāo)蛋白和檢測系統(tǒng)。但是要想找到適合自己目標(biāo)蛋白的封閉液，并不簡單。除了排出一些很明顯不合適的，剩下的就需要多花點(diǎn)時(shí)間嘗試不同種類、不同濃度的封閉液，才能找到最適合的。