大小鼠MCAO造模方法及如何提高成功率的方法介紹
大鼠MCAO造模方法
(1) 麻醉成功后以仰臥位固定于手術(shù)臺(tái),常規(guī)備皮、消毒。將小鼠門齒利用縫合線鉤住、固定，使得頸部被拉伸，方便接下來的手術(shù)操作。利用常規(guī)眼科剪或手術(shù)刀從頸部正中切開,從頸正中切口,利用鑷子鈍性分離頸部腺體組織、筋膜,暴露并分離頸總動(dòng)脈( common carotid artery, CCA)、頸外動(dòng)脈( external carotid artery, ECA)和頸內(nèi)動(dòng)脈( internal carotid artery, ICA)。
瑞沃德呼吸&麻醉解決方案
(2)分離ICA及其顱外分支翼顎動(dòng)脈,利用縫合線打活結(jié)，結(jié)扎翼顎動(dòng)脈，或者直接利用血管夾夾閉翼鄂動(dòng)脈，避免線栓插入翼鄂動(dòng)脈，保持CCA的唯一開放分支為ICA。
(3)分離ECA主干,并利用電凝筆閉塞ECA的分支,結(jié)扎遠(yuǎn)心端并將其間斷。在ECA殘端用眼科剪剪開一“V”型小口,剪口之前用微動(dòng)脈夾夾閉CCA和ICA，避免剪口處出現(xiàn)出血。將預(yù)處理過帶硅膠頭的線栓小心地從ECA插入。
(4) 去除ICA的微動(dòng)脈夾后,插入尼龍線栓直至大腦中動(dòng)脈的起始處,線栓插入17-18mm(見下圖)。根據(jù)筆者的經(jīng)驗(yàn),線栓插入的長(zhǎng)度應(yīng)根據(jù)動(dòng)物體重,如260~280g大鼠,插入深度約17mm,280g以上的大鼠,插入深度約18mm,總之,以遇到輕微的阻力為準(zhǔn),此時(shí)線栓正好進(jìn)入顱內(nèi)的大腦前動(dòng)脈,阻塞大腦中動(dòng)脈的開口。
MCAO線栓法模型操作主要步驟示意圖
(5) 若要恢復(fù)大腦中動(dòng)脈的血流,只需把線栓拔出,使頭端退到頸外動(dòng)脈,頸總動(dòng)脈的血流就可以再灌注到大腦中動(dòng)脈。
(6) 結(jié)扎消毒后逐層縫合皮下組織和皮膚,等動(dòng)物麻醉蘇醒后放回籠中即可。
(7) 手術(shù)結(jié)束后應(yīng)用激光散斑血流成像儀監(jiān)測(cè)大腦皮層血流,當(dāng)看到大腦皮層血液血流降低70%~80%,說明模型制備成功。
小鼠MCAO造模方法
小鼠MCAO模型的制作與大鼠的基本相同,可不結(jié)扎翼顎動(dòng)脈,而是在進(jìn)線栓時(shí)調(diào)整角度小心避開。其他不同之處在于,線栓為5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅膠),長(zhǎng)度為15mm。根據(jù)動(dòng)物體重的具體情況,線栓插入頸內(nèi)動(dòng)脈(10±0.5)mm即可,保證線栓正好進(jìn)入顱內(nèi)的大腦前動(dòng)脈,阻塞大腦中動(dòng)脈的開口。
如何提高M(jìn)CAO造模成功率？
（1）挑選合適線栓，滿足一下幾點(diǎn)要求：
（2）采用散斑血流儀，實(shí)時(shí)觀測(cè)顱腦血流情況。這樣可以準(zhǔn)確判斷線栓是否阻塞MCA，一旦血流灌注量下降超過70%，即代表線栓阻塞MCA。
（3）MCAO線栓手術(shù)屬于顯微操作手術(shù)，不可控因素較多，需要多練習(xí)。一般常規(guī)連續(xù)練習(xí)3個(gè)月左右，即可實(shí)現(xiàn)造模；如果采用血流儀輔助造模，時(shí)間可以縮短至1個(gè)月，手術(shù)過程中可以實(shí)時(shí)調(diào)整線栓位置。另外現(xiàn)在發(fā)文越來越需要漂亮數(shù)據(jù)，瑞沃德的激光散斑血流儀RFLSI Ⅲ可提供高清漂亮血管血流分布圖。
(1) 麻醉成功后以仰臥位固定于手術(shù)臺(tái),常規(guī)備皮、消毒。將小鼠門齒利用縫合線鉤住、固定，使得頸部被拉伸，方便接下來的手術(shù)操作。利用常規(guī)眼科剪或手術(shù)刀從頸部正中切開,從頸正中切口,利用鑷子鈍性分離頸部腺體組織、筋膜,暴露并分離頸總動(dòng)脈( common carotid artery, CCA)、頸外動(dòng)脈( external carotid artery, ECA)和頸內(nèi)動(dòng)脈( internal carotid artery, ICA)。
瑞沃德呼吸&麻醉解決方案
(2)分離ICA及其顱外分支翼顎動(dòng)脈,利用縫合線打活結(jié)，結(jié)扎翼顎動(dòng)脈，或者直接利用血管夾夾閉翼鄂動(dòng)脈，避免線栓插入翼鄂動(dòng)脈，保持CCA的唯一開放分支為ICA。
(3)分離ECA主干,并利用電凝筆閉塞ECA的分支,結(jié)扎遠(yuǎn)心端并將其間斷。在ECA殘端用眼科剪剪開一“V”型小口,剪口之前用微動(dòng)脈夾夾閉CCA和ICA，避免剪口處出現(xiàn)出血。將預(yù)處理過帶硅膠頭的線栓小心地從ECA插入。
MCAO線栓法模型操作主要步驟示意圖(5) 若要恢復(fù)大腦中動(dòng)脈的血流,只需把線栓拔出,使頭端退到頸外動(dòng)脈,頸總動(dòng)脈的血流就可以再灌注到大腦中動(dòng)脈。
(6) 結(jié)扎消毒后逐層縫合皮下組織和皮膚,等動(dòng)物麻醉蘇醒后放回籠中即可。
小鼠MCAO造模方法
小鼠MCAO模型的制作與大鼠的基本相同,可不結(jié)扎翼顎動(dòng)脈,而是在進(jìn)線栓時(shí)調(diào)整角度小心避開。其他不同之處在于,線栓為5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅膠),長(zhǎng)度為15mm。根據(jù)動(dòng)物體重的具體情況,線栓插入頸內(nèi)動(dòng)脈(10±0.5)mm即可,保證線栓正好進(jìn)入顱內(nèi)的大腦前動(dòng)脈,阻塞大腦中動(dòng)脈的開口。
如何提高M(jìn)CAO造模成功率？
（1）挑選合適線栓，滿足一下幾點(diǎn)要求：
- 線栓不可過硬。過硬線栓容易找手感，但是容易出現(xiàn)刺破蛛網(wǎng)膜下腔血管，導(dǎo)致顱內(nèi)出血。同時(shí)過硬線栓還會(huì)改變血管自然形態(tài)，當(dāng)線栓插入血管以后，因?yàn)榫�栓過硬，血管肌張力無法使得線栓改變形態(tài)，只能被線栓改變形態(tài)，導(dǎo)致血管處于緊繃狀態(tài)，對(duì)于再灌注操作不利。
- 選擇硅膠頭盡可能接近圓柱形的線栓，這樣當(dāng)線栓進(jìn)入MCA外后，能夠完全堵塞MCA，而不會(huì)出現(xiàn)縫隙，使得線栓可以立即阻塞MCA。
（2）采用散斑血流儀，實(shí)時(shí)觀測(cè)顱腦血流情況。這樣可以準(zhǔn)確判斷線栓是否阻塞MCA，一旦血流灌注量下降超過70%，即代表線栓阻塞MCA。
（3）MCAO線栓手術(shù)屬于顯微操作手術(shù)，不可控因素較多，需要多練習(xí)。一般常規(guī)連續(xù)練習(xí)3個(gè)月左右，即可實(shí)現(xiàn)造模；如果采用血流儀輔助造模，時(shí)間可以縮短至1個(gè)月，手術(shù)過程中可以實(shí)時(shí)調(diào)整線栓位置。另外現(xiàn)在發(fā)文越來越需要漂亮數(shù)據(jù)，瑞沃德的激光散斑血流儀RFLSI Ⅲ可提供高清漂亮血管血流分布圖。
瑞沃德激光散斑血流成像系統(tǒng)RFLSI Ⅲ
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