QuEChERS和LC-MS/MS測(cè)定全血中二氮卓類藥物含量

概述

苯二氮卓類(BZ)是精神活性藥物，廣泛用于治療焦慮、失眠、煩躁、癲癇、肌肉痙攣和酒精戒斷。BZ短期使用被認(rèn)為是安全有效的。然而，頻繁使用這些藥物可能導(dǎo)致依賴和濫用。由于這一特性，臨床、法醫(yī)和毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室對(duì)監(jiān)測(cè)生物樣品中的這些化合物很感興趣。生物樣品常用的樣品制備方法包括：先將蛋白質(zhì)沉淀，然后是液-液萃取(LLE)或固相萃取(SPE)。本應(yīng)用介紹了一種簡(jiǎn)便、快速、有效的全血苯二氮卓類藥物定量分析方法。

用含0.4%甲酸(FA)的2ml乙腈(MeCN)提取1mL陰性全血。采用400mg硫酸鎂(MgSO4)和100mg醋酸鈉(NaOAc)(預(yù)裝在15 ml離心管中)使相分離加強(qiáng)，并將苯二氮雜卓分離至有機(jī)相中。搖勻離心后，用含150mg MgSO4，50mg PSA， 50mg C18的2ml dSPE管純化，取1 mL上清液。MgSO4可除去萃取物中殘余的水，PSA和C18去除有機(jī)酸和脂肪基質(zhì)共萃取物。得到一個(gè)純凈的提取物，用于LC-MS/MS分析。

建立苯二氮卓類化合物的基質(zhì)匹配的校準(zhǔn)曲線。10個(gè)基質(zhì)匹配溶液濃度在10 ~ 500 ng/mL范圍內(nèi)均呈線性關(guān)系，R范圍為0.9963 ~ 1.0000。通過比較同基質(zhì)校準(zhǔn)曲線與標(biāo)準(zhǔn)溶液的校準(zhǔn)曲線的斜率來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)�；�質(zhì)效應(yīng)很小，從-22%到18%不等。這表明帶有dSPE清除的QuEChERS方法可以充分去除基質(zhì)干擾，這些干擾可能導(dǎo)致離子的顯著抑制或增強(qiáng)。加樣回收率為85.5 ~ 105%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)為10.7%。該方法也應(yīng)用于8份真實(shí)全血樣本，未檢出苯二氮卓類藥物超過10 ng/mL的定量限。

過程

 QuEChERS提取   

a)將2 mL含0.4% FA的MeCN加入15 mL含400mg MgS04和100mg NaOAc的離心管中(ECQUUS15CT)

b)在強(qiáng)化樣品中加入內(nèi)標(biāo)(IS)和適量苯并加釘溶液

c)將1 mL陰性全血加入15 mL試管中

d)使用SPEX 2010 高通量組織研磨儀以1000次/分鐘的速率混勻1分鐘。

e) 3000g離心5分鐘

 dSPE清理  

a)將1ml上清轉(zhuǎn)移到2ml dSPE管(CUMPSC18CT)中。

b)使用SPEX 2010 高通量組織研磨儀以1000次/分鐘的速率混勻1分鐘

c) 300g離心5分鐘。

d)將0.4 mL清洗后的提取物轉(zhuǎn)移到一個(gè)2ml的自動(dòng)取樣器小瓶中，加入0.4 mL試劑水，渦旋30秒

e)樣品已準(zhǔn)備好進(jìn)行LC-MS/MS分析。

 LC-MS/MS方法  

結(jié)果

Linearity and Matrix Effect

全血回收率和RSD%在3個(gè)水平上均有升高

加入200ng/mL苯二氮卓的全血色譜圖

7-氨基氯硝西泮的基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線(R2=0.9998)

超高通量：一次可處理576個(gè)樣品或16個(gè)50mL樣品瓶

超高效率：垂直振蕩專利技術(shù)，1-2min完成困難樣品研磨、均質(zhì)

高均一性：批量處理樣品，程序化處理機(jī)制，均一性、重復(fù)性更好

更人性化：可調(diào)角度彩色觸摸顯示屏，可編輯、調(diào)用、存儲(chǔ)500種方法

適用性廣：程序可調(diào)，更多研磨瓶、研磨介質(zhì)可供選擇，完美契合不同樣品研磨、混勻需求

安全可靠：雙重門鎖，研磨過程更安全；設(shè)置保密程序，限制查看特定方法

低溫研磨：專業(yè)Kryo-Tech低溫組件及可調(diào)循環(huán)程序，維持研磨全過程低溫，適合溫度敏感型樣品