動(dòng)物微透析活體取樣技術(shù)操作要點(diǎn)匯總

 
 微透析技術(shù)的基本原理和方法
   
微透析(Microdialysis)技術(shù)是從上世紀(jì)八十年代發(fā)展起來(lái)的一種微量生物化學(xué)采樣、檢測(cè)技術(shù)，其基本原理是采用具有一定截留分子量的纖維半透膜制成極細(xì)的微透析探頭(Microdialysis Probe，MDP)，將探頭埋入待測(cè)的組織區(qū)域內(nèi)，以恒定速度向探頭內(nèi)灌注與組織液成分相近的等滲灌流液，當(dāng)灌流夜流經(jīng)探頭前端透析膜時(shí)，位于探頭膜外側(cè)的組織內(nèi)較小分子量生物活性物質(zhì)將順濃度梯度從膜外擴(kuò)散入膜內(nèi)并隨灌流液被引流出探頭外，以一定的時(shí)間間隔有序地接收透析液，由于透析管中的灌流液不斷流動(dòng)更新，因此跨膜濃度梯度始終存在，微透析得以持續(xù)進(jìn)行。并采用高靈敏度化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)連續(xù)檢測(cè)收集的透析液中待測(cè)生物活性物質(zhì)濃度，便可監(jiān)測(cè)活體動(dòng)物或人體特定組織區(qū)域內(nèi)細(xì)胞外生物活性物質(zhì)濃度隨時(shí)間改變的動(dòng)態(tài)變化。由于該技術(shù)具有活體取樣、動(dòng)態(tài)觀察、定量分析、對(duì)組織損傷小、取樣少、方便、快捷、可連續(xù)監(jiān)測(cè)且易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，因此在國(guó)外已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，對(duì)醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生命科學(xué)等領(lǐng)域，提供嶄新的技術(shù)的發(fā)展空間，并隨著這項(xiàng)技術(shù)的不斷改進(jìn)與完善，在近幾年開(kāi)始在臨床上加以應(yīng)用。
  微透析技術(shù)是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展起來(lái)的一種新型生物化學(xué)采樣技術(shù)。它可以對(duì)活體組織細(xì)胞外液進(jìn)行生物化學(xué)采樣，幾乎適用于所用小分子活性物質(zhì)的分析。而且對(duì)組織損傷極小。在麻醉或清醒的生物體上使用，特別適合于深部組織和重要器官的活體生化研究。
 
微透析系統(tǒng)一般由微透析探針、連接管、收集器、灌流液和微量注射泵組成。微透析探針是核心部件，由透析膜（管）與入液管和出液管連接而成，探針前端是多碳聚合物半透膜，透析分子極限為6－100kda,多為20kda。灌流液多為生理鹽水、林格氏液和人造腦脊液。
 
應(yīng)用范圍
 
兒茶酚氨分析 精神藥物學(xué) 乙酰膽堿/酰膽堿分析 神經(jīng)病理及癌癥研究
氨基酸分析 藥物動(dòng)態(tài)學(xué)及毒理學(xué) 各種組織生化/藥物分析 生理學(xué) 藥理學(xué)
 
在藥代動(dòng)力學(xué)研究領(lǐng)域、腦神經(jīng)重癥監(jiān)測(cè)、器官移植、心臟手術(shù)、糖尿病、整形手術(shù)等中有重要應(yīng)用，發(fā)展速度極快。
 
微透析與傳統(tǒng)的灌流方法相比
 
微透析技術(shù)是一種在體取樣技術(shù)，其最大優(yōu)點(diǎn)是可在基本不干擾體內(nèi)正常生命過(guò)程的情況下進(jìn)行在體（in vivo），實(shí)時(shí)（real time）和在線（on line）取樣。它具有以下特點(diǎn)：
 
（1）時(shí)間分辨性，可連續(xù)跟蹤體內(nèi)多種化合物量隨時(shí)間的變化。
 
（2）空間分辨性，取樣即時(shí)即測(cè)，可真實(shí)代表取樣位點(diǎn)目標(biāo)化合物的濃度，同時(shí)在體內(nèi)不同部位插入探針可研究目標(biāo)化合物的體內(nèi)分布。
 
（3）提供不含蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的游離態(tài)小分子化合物，樣品因不含蛋白質(zhì)、酶等大分子物質(zhì)，可不經(jīng)預(yù)處理直接用于測(cè)定。對(duì)藥物研究有重要意義。
 
（4）不需處死動(dòng)物和制備組織勻漿，不破壞機(jī)體完整性，可維持實(shí)際生理?xiàng)l件，消除傳統(tǒng)藥物代謝研究中因組織均勻化破壞細(xì)胞隔室造成對(duì)代謝研究結(jié)果的影響，減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量，并可獲得有關(guān)藥物代謝中間過(guò)程的信息。（傳統(tǒng)方法對(duì)血清、尿或糞便中代謝物濃度測(cè)定只能了解代謝的最終產(chǎn)物，而不能反映中間過(guò)程）
 
（5）研究藥動(dòng)學(xué)可從同一動(dòng)物收集大量樣本而不損失體液量，避免了傳統(tǒng)研究方法中因采血后血容量減少所造成對(duì)藥物分布及消除的影響，其時(shí)間分辨性可使藥動(dòng)學(xué)資料更準(zhǔn)確。
 
（6）樣品體積恒定，樣品中各成分濃度基本不變，膜對(duì)藥物的非特異性吸附較少。
 
（7）不會(huì)因在室溫取樣而酶解，提高樣品穩(wěn)定性，可從容地進(jìn)行分離和測(cè)定。
 
（8） 損傷小，使取樣可在清醒、自由活動(dòng)的動(dòng)物體內(nèi)多個(gè)器官以及同一器官多個(gè)位點(diǎn)連續(xù)取樣，且動(dòng)物本身自成空白對(duì)照，能準(zhǔn)確及時(shí)掌握到藥物代謝的中間動(dòng)態(tài)信息。
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微透析是一種從生物活體內(nèi)進(jìn)行動(dòng)態(tài)微量生化取樣的新技術(shù)，能對(duì)大鼠、小鼠、兔子、羊、狗、猴等大小型動(dòng)物的血液、腦、眼睛、心臟等組織區(qū)域進(jìn)行微透析取樣，具有活體連續(xù)取樣、動(dòng)態(tài)觀察、定量分析、采樣量小、組織損傷輕等特點(diǎn)，可運(yùn)用于精神藥物、生理學(xué)、藥理學(xué)、生命胺分析、藥物分析等研究領(lǐng)域。  
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