全視野細(xì)胞成像分析儀在觀察CPE細(xì)胞病變形態(tài)變化的應(yīng)用

CPE實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和操作有如下幾點(diǎn)需要注意：

• 宿主細(xì)胞接種密度 – 細(xì)胞必須覆蓋整個(gè)孔底區(qū)域，以便觀察病變。如果宿主細(xì)胞的密度沒有接近100%，未被細(xì)胞覆蓋的區(qū)域可能會(huì)對(duì)CPE的區(qū)分鑒定產(chǎn)生干擾
• 病毒濃度 – 在CPE實(shí)驗(yàn)前最好進(jìn)行病毒滴度測(cè)定，以確定能獲得合適的TCID50結(jié)果的最佳病毒濃度范圍
• 通量 – 傳統(tǒng)的CPE實(shí)驗(yàn)通常在6或24孔板中進(jìn)行。基于孔板成像的細(xì)胞分析儀可實(shí)現(xiàn)96甚至384孔板中的CPE檢測(cè)
• 成像 – 傳統(tǒng)的CPE檢測(cè)通常依靠肉眼或顯微鏡觀察，缺失原始圖像記錄。成像細(xì)胞分析儀可以快速對(duì)整塊板的所有孔進(jìn)行全孔成像，獲得明場(chǎng)和熒光細(xì)胞圖片
• 分析 – 傳統(tǒng)的CPE分析需要經(jīng)驗(yàn)豐富的研究人員進(jìn)行人工鑒定評(píng)估，耗費(fèi)時(shí)間和精力，而且很難避免人與人之間的判斷差異。成像細(xì)胞分析儀的算法可通過細(xì)胞覆蓋率的缺失，細(xì)胞數(shù)的減少或細(xì)胞形態(tài)的變化等自動(dòng)分析CPE的程度

 
  Celigo軟件專門為病毒/疫苗相關(guān)應(yīng)用開發(fā)了一套算法。針對(duì)CPE有多種分析方法，分別應(yīng)對(duì)不同的病變類型，包括細(xì)胞脫落，細(xì)胞皺縮/腫脹和細(xì)胞的形態(tài)變化等。
 
案例1：細(xì)胞發(fā)生明顯脫落
宿主細(xì)胞被細(xì)胞感染后死亡、脫落，孔底出現(xiàn)大片空白區(qū)域。Celigo軟件可以通過紋理 (Texture) 算法識(shí)別細(xì)胞覆蓋的區(qū)域，并計(jì)算細(xì)胞融合率 (Confluence)，快速分析整板每孔CPE的程度。
   
案例2：細(xì)胞產(chǎn)生皺縮，并未脫落
宿主細(xì)胞被病毒感染后發(fā)生皺縮或堆疊，顏色發(fā)暗，但未發(fā)生脫落。Celigo軟件的紋理算法可通過對(duì)比度的差異區(qū)分有病變和沒有病變的細(xì)胞，并計(jì)算出病變細(xì)胞的融合率。
 
案例3：細(xì)胞變圓
宿主細(xì)胞被病毒感染后形態(tài)發(fā)生變化，由梭形變?yōu)閳A形。Celigo軟件可識(shí)別每一個(gè)細(xì)胞的輪廓并計(jì)算出圓度，并通過軟件內(nèi)置的類流式設(shè)門功能區(qū)分梭形細(xì)胞和圓形細(xì)胞。
   
案例4：多重分析
同一個(gè)CPE實(shí)驗(yàn)，有時(shí)可以用多種方法進(jìn)行分析。比如下圖的宿主細(xì)胞被病毒感染后，有部分細(xì)胞發(fā)生了脫落，也有部分細(xì)胞發(fā)生腫脹，變得更圓更亮。Celigo可通過融合率分析，細(xì)胞計(jì)數(shù)，或細(xì)胞亮度/圓度的分析從多個(gè)層面對(duì)細(xì)胞病變進(jìn)行評(píng)估，得到更全面準(zhǔn)確的結(jié)果。
 
疫情爆發(fā)以來，Celigo已被多個(gè)單位用于新冠病毒疫苗的開發(fā)和檢定，以及新冠病毒藥物的高通量篩選。Celigo也是多種病毒研究和疫苗開發(fā)的利器。下圖是Celigo用戶研究過的部分病毒名稱大集合。
 
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