空間表型分析探索濾泡性淋巴瘤早期臨床失敗的潛在機(jī)制

濾泡性淋巴瘤(Follicular lymphoma, FL)是最常見(jiàn)的惰性非霍奇金淋巴瘤，在臨床上存在明顯的異質(zhì)性。一些患者可能進(jìn)展為早期淋巴瘤或轉(zhuǎn)化為侵襲性淋巴瘤，通常為彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)，預(yù)后較差。濾泡淋巴瘤國(guó)際預(yù)后指數(shù)(FLIPI)，可用于評(píng)估患者風(fēng)險(xiǎn)和預(yù)測(cè)預(yù)后，但不能預(yù)測(cè)區(qū)分哪些患者無(wú)法達(dá)到EFS12/EFS24（12個(gè)月或24個(gè)月內(nèi)無(wú)發(fā)病癥狀），即早期失敗。目前為止，尚未找到生物標(biāo)志物可以輔助預(yù)測(cè)患者是否可以實(shí)現(xiàn)EFS12/EFS24。

基于腫瘤微環(huán)境在癌癥治療中的重要作用，梅奧診以及來(lái)自美國(guó)、意大利、法國(guó)中心研究團(tuán)隊(duì)提出腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞的表型和分布可以預(yù)測(cè)早期失敗，并且將這些數(shù)據(jù)整合到臨床預(yù)后模型中可以改善濾泡性淋巴瘤患者的風(fēng)險(xiǎn)分層的假設(shè)。為此，研究人員結(jié)合CyTOF和CODEX技術(shù)對(duì)腫瘤內(nèi)免疫表型進(jìn)行描繪和鑒別，發(fā)現(xiàn)濾泡內(nèi)CD4表達(dá)的缺乏可以預(yù)測(cè)濾泡性淋巴瘤的早期失敗，結(jié)合FLIPI系統(tǒng)可以提高高�；颊叩淖R(shí)別。

研究中共評(píng)估了496名患者，通過(guò)組織芯片對(duì)樣本中的CD4、CD8、FOXP3、CD32b、CD14、CD68、CD70、SIRP-α、TIM3、PD-1和PD-L1進(jìn)行的檢測(cè)。先單獨(dú)評(píng)估免疫組化檢查結(jié)果的預(yù)后價(jià)值，然后再聯(lián)合FLIPI進(jìn)行評(píng)估，證實(shí)了濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)的缺乏是濾泡性淋巴瘤的獨(dú)立預(yù)后因素。

濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)的缺乏是濾泡性淋巴瘤的獨(dú)立預(yù)后因素

研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步使用了CODEX 和CyTOF技術(shù)。從生物學(xué)驗(yàn)證的角度，對(duì)患者的腫瘤免疫表型特征和空間定位進(jìn)行了分析。獲得CODEX實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)后，結(jié)合機(jī)器學(xué)習(xí)算法對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別，同時(shí)標(biāo)記每個(gè)蛋白標(biāo)志物的表達(dá)強(qiáng)度和空間定位。通過(guò)無(wú)監(jiān)督聚類(lèi)，鑒定出14個(gè)細(xì)胞亞群，包括12個(gè)免疫細(xì)胞群，一個(gè)血管細(xì)胞群和一個(gè)未定義的細(xì)胞群。

鑒別出細(xì)胞表型后，使用T-SNE進(jìn)行降維數(shù)據(jù)可視化。結(jié)合免疫熒光圖像發(fā)現(xiàn)，CD3+ CD8+ T細(xì)胞大多位于濾泡外；CD3+ CD4+ CD45RO+ 記憶性T細(xì)胞主要集中在濾泡內(nèi)，CD3+ CD4+ CD45RO- 非記憶性T細(xì)胞則在濾泡外聚集。

為了更深入地了解腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞和其他微環(huán)境成分的空間關(guān)系，再現(xiàn)組織的動(dòng)態(tài)空間環(huán)境�；�于細(xì)胞-細(xì)胞接觸的特點(diǎn)，識(shí)別出13個(gè)細(xì)胞鄰域（cellular neiborhood）或細(xì)胞社區(qū)（cellular communities）。值得注意的是，在CD4+ 記憶性T細(xì)胞富集的細(xì)胞社區(qū)中，僅富集激活態(tài)的CD4+ 記憶性T細(xì)胞。對(duì)比細(xì)胞類(lèi)型和鄰近社區(qū)相對(duì)于濾泡的分布，濾泡內(nèi)CD4 + T細(xì)胞是激活的、非衰竭效應(yīng)記憶T細(xì)胞。這些細(xì)胞在對(duì)抗腫瘤的免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

結(jié)合基因表達(dá)譜的結(jié)果和臨床生存數(shù)據(jù)，可以證明濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)和腫瘤基因表達(dá)譜是濾泡性淋巴瘤的獨(dú)立預(yù)后因素。綜合濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)和FLIPI評(píng)分，有可能預(yù)測(cè)濾泡性淋巴瘤的EFS12/EFS24。

綜上，研究人員使用CODEX技術(shù)對(duì)濾泡性淋巴瘤患者樣本中的免疫細(xì)胞表型、空間關(guān)系、空間表型進(jìn)行了深度分析，發(fā)現(xiàn)可以對(duì)抗腫瘤的效應(yīng)記憶T細(xì)胞在濾泡內(nèi)富集，并處于激活、非衰竭狀態(tài)，從分子機(jī)制層面提供了有效數(shù)據(jù)，支持綜合濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)和FLIPI評(píng)分作為未來(lái)濾泡性淋巴瘤EFS預(yù)測(cè)指標(biāo)的可能性。

關(guān)于CODEX

CODEX技術(shù)是由斯坦福大學(xué)Garry Nolan教授開(kāi)發(fā)的新一代空間蛋白組學(xué)分析方案，通過(guò)將抗體偶聯(lián)上特異性核酸分子條形碼進(jìn)行互補(bǔ)熒光分子檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)在一個(gè)切片樣本上多達(dá)40個(gè)以上靶點(diǎn)蛋白的自動(dòng)化染色、成像檢測(cè)和空間分布數(shù)據(jù)分析，可以很好的解析組織微環(huán)境內(nèi)復(fù)雜的細(xì)胞組成和空間分布。觀看視頻了解CODEX平臺(tái)技術(shù)原理。

[參考信息]
1. Lack of intrafollicular memory CD4+T cells is predictive of early clinical failure in newly diagnosed follicular lymphoma. Blood Cancer Journal volume 11, Article number: 130 (2021).