支原體污染的來(lái)源及各種檢測(cè)方法的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)

現(xiàn)實(shí)是這樣的

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)室中最常見(jiàn)污染之一，保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中有15~35%存在支原體污染[1]。

一被污染深似海，從此快樂(lè)是路人。

情況是這樣的

支原體（Mycoplasma）是一類(lèi)沒(méi)有細(xì)胞壁、形狀多變、能通過(guò)濾器的可獨(dú)立生存的最小原核微生物，大小為0.1~0.3μm，可以在培養(yǎng)基中自己生存，也可以與細(xì)胞共生或胞內(nèi)寄生[2]。支原體的繁殖周期較短（1~9小時(shí)）[3]，因此，一旦污染，支原體數(shù)量會(huì)快速增長(zhǎng)，3～5天內(nèi)能在培養(yǎng)基中達(dá)106CFU/mL。
 

支原體污染可能來(lái)自培養(yǎng)基、血清、操作人員、污染的操作環(huán)境、污染的細(xì)胞和水浴鍋交叉污染等等，但是人源的污染概率最大，數(shù)據(jù)表明80.6%的實(shí)驗(yàn)人員為支原體攜帶者[4]。進(jìn)而影響細(xì)胞生長(zhǎng)率、細(xì)胞形態(tài)、基因表達(dá)、細(xì)胞代謝和細(xì)胞活力。
 

支原體污染不易被察覺(jué)，因此定期檢測(cè)和過(guò)程樣品監(jiān)測(cè)顯得非常重要，如細(xì)胞庫(kù)檢測(cè)、生產(chǎn)用細(xì)胞檢測(cè)、培養(yǎng)過(guò)程樣品污染監(jiān)測(cè)和檢定用細(xì)胞檢測(cè)，防患于未然，各個(gè)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)監(jiān)控必不可少。

那能怎么辦？

選用合適的方法，及時(shí)定期監(jiān)測(cè)，重要節(jié)點(diǎn)把控，即可！
 

目前支原體檢測(cè)方法大致分7種，主要根據(jù)支原體的特征，如培養(yǎng)基中能自由生活、個(gè)頭小、形狀多變、可附著到細(xì)胞上、有獨(dú)立的遺傳物質(zhì)且A-T含量高、有特有的呼吸代謝系統(tǒng)、有獨(dú)特的細(xì)胞組成等等來(lái)建立的檢測(cè)方法[5]。

 

客觀的講，每個(gè)方法都有自己的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，但目前主流檢測(cè)方法是培養(yǎng)法、指示細(xì)胞法、NAT方法和生化法。幾種方法特點(diǎn)對(duì)比如下：

 

大家對(duì)這幾種方法并不陌生，其中生化法是基于支原體特有的酶進(jìn)行支原體檢測(cè)�；畹闹г�體溶解后釋放大量能力代謝相關(guān)酶，與底物反應(yīng)促進(jìn)ADP轉(zhuǎn)化為ATP。通過(guò)熒光素酶法間接反應(yīng)樣品中添加底物前后ATP的變化，進(jìn)而判斷有無(wú)支原體污染和評(píng)估污染程度。

生化法支原體檢測(cè)最典型的特征是能檢測(cè)活的支原體，檢測(cè)時(shí)間短。因此很多企業(yè)將該方法用于常規(guī)細(xì)胞樣品和培養(yǎng)過(guò)程樣品快速檢測(cè)，檢測(cè)陽(yáng)性樣品可以借助更準(zhǔn)確的方法進(jìn)行確認(rèn)，如培養(yǎng)法或者NAT方法。

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MycoAlert™支原體試劑盒搭配Lucetta™2支原體檢測(cè)儀，可以對(duì)180多種支原體以及細(xì)胞培養(yǎng)物6大支原體污染進(jìn)行快速、靈敏的污染篩查。通過(guò)對(duì)加入底物前（讀值A(chǔ)）和加入底物后（讀值B）發(fā)光變化，計(jì)算B/A比值來(lái)判斷是否為支原體污染和評(píng)估污染程度大小[6]。

 

產(chǎn)品特點(diǎn)

• 簡(jiǎn)單快速：20分鐘拿到檢測(cè)結(jié)果
• 應(yīng)用方便：細(xì)胞上清與試劑混合，兩次讀值，計(jì)算比值即可
• 應(yīng)用廣泛：可檢測(cè)所有常規(guī)的支原體和無(wú)膽甾原體的污染，適用于多種樣品類(lèi)型
• 靈敏度佳：能達(dá)到50cfu/mL靈敏度，可有效避免假陰性結(jié)果
• 多種選擇：不同規(guī)格試劑盒可供選擇
• 整體方案：試劑盒中含有實(shí)驗(yàn)所需試劑，可以搭配Lucetta™2系統(tǒng)，方便使用

參考文獻(xiàn)：

[1]Drexler HG and Uphoff CC., 2002. Mycoplasma contamination of cellcultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination,prevention Cytotechnol 39: 23–38

[2]Rottem S., 2003. Interaction ofmycoplasmas with host cells.2003, Physiol Rev. 83(2): 417-432.

[3]Rottem S., 2002. Invasion of Mycoplasmas into and Fusion with HostCells. In: Razin S., Herrmann R. (eds) Molecular Biology andPathogenicity of Mycoplasmas. Springer, Boston, MA

[4]NikfarjamL, Farzaneh P., 2012. Prevention and Detection of MycoplasmaContamination in Cell Culture. Cell J. 13(4):203-212

[5]加菲說(shuō)檢測(cè)｜支原體檢測(cè)方法（四）賽默飛生物工藝2020-06-23

[6]MycoAlert™ mycoplasma detection kit, Mycoplasma detectionassay-Instructions for use.

https://bioscience.lonza.com/lonza_bs/CH/en/download/product/asset/30191