鼠尾光照測(cè)痛實(shí)驗(yàn)

尾閃試驗(yàn)( tail-flick test)也叫鼠尾光照測(cè)痛實(shí)驗(yàn)，是一種用熱作刺激的急性傷害性知覺疼痛的實(shí)驗(yàn)，即用熱刺激動(dòng)物（鼠類）的尾巴，當(dāng)其尾部受到傷害性刺激時(shí)會(huì)產(chǎn)生明顯的躲避反應(yīng)，這是一種脊髓的屈曲反射。該疼痛模型最早由D'Amour和Smith在1941年描述，它可測(cè)試輕度麻醉的動(dòng)物而且不受動(dòng)物運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性的影響，因而比熱板試驗(yàn)具有一定的優(yōu)越性，但是尾閃試驗(yàn)的尾巴溫度可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，容易造成假陽性或假陰性，試驗(yàn)最終的行為反應(yīng)也較為復(fù)雜（如舔其后爪）。Janssen等(1963)根據(jù)尾閃試驗(yàn)用溫水(49度)替代熱光源來刺激動(dòng)物的尾巴測(cè)試其反應(yīng)時(shí)間，更新的實(shí)驗(yàn)裝置則可用較局限的熱點(diǎn)刺激，專門刺激菜一個(gè)單一的腳爪，然后測(cè)定其反應(yīng)潛伏期，這比熱板試驗(yàn)刺激的4個(gè)全部的腳爪或尾閃試驗(yàn)刺激的尾部更為精細(xì)。

（一）實(shí)驗(yàn)材料

1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成年雄性小鼠(30 - 35g)或大鼠(200 - 250g)，分組飼養(yǎng)。

2．實(shí)驗(yàn)藥物生理鹽水（對(duì)照）與鎮(zhèn)痛藥物（如嗎啡，l0mg/kg，皮下注射）。

3．帶27((大鼠)或30G（小鼠）針頭的1.0ml注射器。

4．帶自動(dòng)計(jì)時(shí)器或秒表的尾閃試驗(yàn)裝置。

5．限制大鼠或小鼠活動(dòng)的包括毛巾或塑料小筒。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

1、從動(dòng)物房取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，稱重后，讓動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)30min，將對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組分開；

2、藥物準(zhǔn)備對(duì)照組（生理鹽水等）及給藥組（如嗎啡等，計(jì)算藥物濃度，如大鼠按2mg，kg紿藥，小鼠按10mg/kg給藥）；

3、測(cè)定動(dòng)物的基礎(chǔ)反應(yīng)潛伏期( baseline latencies) 用尾閃試驗(yàn)測(cè)試儀（即在一小孔的平板下有一個(gè)發(fā)熱光源，將大鼠（尾尖部前50mm左右）或小鼠(尾尖部前約15mm)的尾部放在小孔的上方，啟動(dòng)發(fā)熱光源開始計(jì)時(shí)，直到尾巴躲避為止，調(diào)整光源的強(qiáng)度，設(shè)大多數(shù)鼠的尾部躲閃時(shí)間在3- 4s，如果沒有躲避反射則把試驗(yàn)終止時(shí)間設(shè)定為10s，以免燒傷；

4、藥物注射將不同的藥物包括對(duì)照溶液，隨機(jī)順序注射到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。注意計(jì)算好給藥時(shí)間與試驗(yàn)測(cè)試的時(shí)間間隔，試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間，同時(shí)給出足夠的機(jī)動(dòng)時(shí)間（如實(shí)驗(yàn)記錄，藥物更換等），必要時(shí)讓另外的人注射對(duì)照劑或?qū)嶒?yàn)藥品（盲法試驗(yàn)）；

5、在給藥后15，30及60min時(shí)，即測(cè)試尾閃反應(yīng)，將動(dòng)物放到尾閃測(cè)試板并把其尾部放到光源小孔上，即開始計(jì)時(shí)，觀察動(dòng)物尾部躲避反應(yīng)的時(shí)間，或直到終止(cut-off)時(shí)間。注意一次試驗(yàn)只測(cè)1個(gè)時(shí)間點(diǎn)，而不是3個(gè)時(shí)間點(diǎn)；

6、將動(dòng)物放到尾閃測(cè)試儀上到反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)的潛伏期或終止實(shí)驗(yàn)時(shí)間記錄下來，在所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物完成測(cè)試后（一般每組至少8個(gè)數(shù)據(jù)），分組將其平均并作統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估。

尾閃試驗(yàn)時(shí)，也常用到一種稱為最大可能效應(yīng)百分比（percent max．mum possible effect，MPE，%），即：MPE(%)=[（給藥后一基礎(chǔ)反應(yīng)），（終止時(shí)間一基礎(chǔ)反應(yīng)）] x 100這里基礎(chǔ)反應(yīng)與給藥后均指反應(yīng)潛伏期，所有動(dòng)物在測(cè)試前，應(yīng)該先測(cè)定一下它的反應(yīng)潛伏期（基礎(chǔ)反應(yīng)反應(yīng)潛伏期）；給藥后反應(yīng)潛伏期是指動(dòng)物接受藥物（包括對(duì)照用生理鹽水或其他載體）注射（或灌注）后實(shí)驗(yàn)中的反應(yīng)潛伏期；終止時(shí)間是指給藥后動(dòng)物不能對(duì)熱作出反應(yīng)而終止試驗(yàn)的時(shí)間(10s)。

（三）注意事項(xiàng)

1、如果給藥前或?qū)φ战M動(dòng)物測(cè)不到反應(yīng)或反應(yīng)潛伏期很靠近試驗(yàn)終止時(shí)間，說明刺激強(qiáng)度太弱（光源溫度設(shè)定較低），必須加大刺激強(qiáng)度。

2、必須保持所有的實(shí)驗(yàn)程痔一致，盡量輕巧抓取動(dòng)物，讓動(dòng)物有足夠的時(shí)間適應(yīng)實(shí)驗(yàn)者的氣味及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，否則可造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的明顯波動(dòng)或不能重復(fù)。

3、刺激光源的強(qiáng)弱，即刺激的強(qiáng)度太高或太弱均可使試驗(yàn)結(jié)果變化較大，而且高強(qiáng)度的刺激可能掩蓋實(shí)驗(yàn)藥物的效果，因此，用藥前的基礎(chǔ)測(cè)試非常重要。

4、為了減少實(shí)驗(yàn)的誤差，一般適量限制動(dòng)物的活動(dòng)，如用毛巾裹住動(dòng)物或把它們放入小筒中，這兩種方法掌握不當(dāng)都可造成動(dòng)物的壓抑( stress)行為而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 

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