小鼠腦立體定位注射的操作方法詳解

首先了解小鼠腦部結(jié)構(gòu)的大概位置，主要講述側(cè)腦室和海馬區(qū)域的位置。

側(cè)腦室的位置，如圖顯示的是比較容易注射的位置

Interaural 耳間 3.58 mm—3.22 mm

Bregma 前鹵 -0.22 mm-- -0.58 mm

最佳的位置為：X= 1.00 mm   Z= 1.5 mm

Lateral 橫向距離，0.60 mm-2.16 mm，最佳位置為0.80 mm

Y= 0.80 mm。

最終決定皮層區(qū)域的最佳位置

X=1.00 mm, Y= 0.80 mm, Z= 1.5 mm

海馬區(qū)域

Interaural 2.58 mm—1.50 mm

Bregma -1.22 mm-- -2.30 mm

前鹵 (Bregma)

海馬區(qū)域最佳位置，X=1.5 mm, Y= 2.0 mm, Z=2.0 mm。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 利用某些顱骨外面的標(biāo)志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢狀縫等)或其它參考點(diǎn)所規(guī)定的三維坐標(biāo)系統(tǒng)，來(lái)確定皮層下某些神經(jīng)核團(tuán)結(jié)構(gòu)的位置.

注意：操作為大鼠上門(mén)齒卡入橫桿，調(diào)節(jié)旋鈕壓緊鼻桿；將耳桿插入大鼠耳道，平衡調(diào)節(jié)左、右耳桿，使大鼠兩耳間連線與耳桿在同一直線上，保證左、右耳桿的刻度位置相同后調(diào)節(jié)旋鈕鎖緊耳桿。大鼠固定完好的判斷標(biāo)準(zhǔn)：鼻對(duì)正中，頭部不動(dòng)，提尾不掉，目測(cè)大腦放置水平（使顱骨水平）。

2. 前囟點(diǎn)即Bregma點(diǎn)，位于冠狀縫和矢狀縫的交接處，以其作為顱骨三維坐標(biāo)系統(tǒng)原點(diǎn)O。

3. Bregma點(diǎn)定位過(guò)程大體分為: 選定腦部靠中間的位置。剪除大鼠頂被毛后，用碘酒或酒精消毒，縱向切開(kāi)頭皮，用止血鉗將皮膚左右分開(kāi)，用刀片刮去顱蓋骨膜，或用雙氧水腐蝕頭蓋骨膜，徹底去除骨膜后讓Bregma點(diǎn)顯現(xiàn)出來(lái)。用腦定位儀讀取Bregma點(diǎn)數(shù)值作為三維坐標(biāo)原點(diǎn)O。

4. 側(cè)腦室位置的定位，以眼間連線的中點(diǎn)為起點(diǎn)，垂直于眼間連線后移3-4 mm，然后側(cè)移1.1 mm左右，向下3 mm左右，即進(jìn)入側(cè)腦室。

具體的位置依據(jù)小鼠的腦大小確定，坐標(biāo)值，即ML值（X軸）、AP值（Y軸）、DV值（Z軸）。側(cè)腦室位置為前囟點(diǎn)旁開(kāi)1.5 mm，向后囟方向1.1 mm，深2.0 mm（坐標(biāo)即為±1.5，-1.1，-4.5）。調(diào)節(jié)X軸（1.5個(gè)單位）及Y軸（1.1個(gè)單位）旋鈕移動(dòng)操作臂到坐標(biāo)位置。

海馬區(qū)域的位置，X= 1.5 mm, Y = 2 mm, Z= 1.5 mm。

5. 10ul的微量注射器，注射劑量是2ul（兩側(cè)注射，各1 ul）,打藥時(shí)間2 min左右，打藥之后再停留2 min，然后慢慢的拔出注射器針頭。