ELISPOT酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)系統(tǒng)的配置與使用指南

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)，即ELISPOT技術(shù)，是被用于測定分泌特異性抗體或細(xì)胞因子的單個(gè)細(xì)胞對(duì)特異性抗原免疫應(yīng)答能力的細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)。它集高靈敏度、高通量、單細(xì)胞水平、功能性檢測等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于疫苗免疫原性的效價(jià)評(píng)估、細(xì)胞治療的效價(jià)評(píng)估、基因治療的毒性評(píng)估、傳染性疾病/自身免疫性疾病的診斷和療效評(píng)估、以及腫瘤治療的療效評(píng)估、器官移植免疫排斥的研究、以及基礎(chǔ)免疫學(xué)等的研究中。

ELISPOT技術(shù)和ELISA技術(shù)都是基于雙抗夾心法，但是ELISPOT技術(shù)是對(duì)單個(gè)細(xì)胞的功能研究，在整個(gè)ELISPOT流程中加入了細(xì)胞培養(yǎng)的過程以及斑點(diǎn)分析的流程，這就使整個(gè)ELISPOT操作和分析變得復(fù)雜起來。為了確保實(shí)驗(yàn)操作和分析的客觀性，以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和可重復(fù)性，必須建立一套標(biāo)準(zhǔn)化的流程，包括實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)驗(yàn)人員的專業(yè)培訓(xùn)；樣本制備和處理過程的標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果和數(shù)據(jù)分析流程的標(biāo)準(zhǔn)化等。
作為最早在國內(nèi)引入ELISPOT技術(shù)的生物公司，為了在國內(nèi)普及ELISPOT技術(shù)，達(dá)科為和國內(nèi)外多位ELISPOT專家以及多家ELISPOT試劑和儀器廠家合作，并針對(duì)ELISPOT技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化流程方面自主開發(fā)了一系列產(chǎn)品。是以，達(dá)科為可以說是當(dāng)之無愧的ELISPOT專家。
 

1．樣本制備
樣本制備中，細(xì)胞狀態(tài)（細(xì)胞分離、細(xì)胞凍存）、細(xì)胞培養(yǎng)（培養(yǎng)基有無血清）、細(xì)胞數(shù)量和活率對(duì)ELISPOT實(shí)驗(yàn)都有一定程度的影響。
1.1 細(xì)胞分離
ELISPOT檢測的是細(xì)胞免疫功能，在細(xì)胞分離過程中，需要保持細(xì)胞存活率，確保細(xì)胞功能不受改變。
 

不同脾細(xì)胞分離方法對(duì)ELISPOT檢測的影響（達(dá)科為數(shù)據(jù)）
 

如上圖，傳統(tǒng)的紅細(xì)胞裂解法在紅細(xì)胞裂解的過程中，可能導(dǎo)致不同程度的白細(xì)胞損傷，進(jìn)而影響細(xì)胞狀態(tài)；達(dá)科為“達(dá)優(yōu)”品牌分離液專為ELISPOT技術(shù)開發(fā)安全無毒，確保高純度淋巴細(xì)胞的同時(shí)，確保細(xì)胞的高活率。

 
1.2 培養(yǎng)基
血清中含有未知的ELISPOT敏感成分（如異嗜性抗體等），既可能抑制斑點(diǎn)的生成，也可能增加噪聲斑點(diǎn)。因此，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，建議使用無血清培養(yǎng)基。

含血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基對(duì)ELISPOT檢測的影響（達(dá)科為數(shù)據(jù)）
 

 

凍存細(xì)胞存活率對(duì)ELISPOT的影響
 

 
1.4 細(xì)胞數(shù)量和活率
由于ELISPOT技術(shù)檢測的是分泌細(xì)胞因子/抗體等的陽性細(xì)胞數(shù)或頻率，若每孔/每板/每次鋪板的細(xì)胞數(shù)不能保持一致，那得到的斑點(diǎn)數(shù)量SFU（斑點(diǎn)形成單元）就沒有可比性。另外，細(xì)胞狀態(tài)好壞是ELISPOT結(jié)果是否準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵因素之一。除了影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，細(xì)胞狀態(tài)不佳還會(huì)影響斑點(diǎn)圖像的美觀性。

因此，確保細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析的結(jié)果準(zhǔn)確性以及流程標(biāo)準(zhǔn)化，才能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性和可信度。樣本細(xì)胞的來源主要是外周血或脾臟，即使進(jìn)行了分離純化，也不能避免分離后的細(xì)胞存在不同程度的紅細(xì)胞和血小板干擾。故而傳統(tǒng)的臺(tái)盼藍(lán)染色方法并不能真正精確計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞，采用雙熒光核染料AO/PI染色可以精準(zhǔn)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞和活率，是ELISPOT檢測流程中的推薦選擇。
 

細(xì)胞計(jì)數(shù)中任何一個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)生改變都可能影響細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果。
 

達(dá)科為公司為ELISPOT操作流程中的細(xì)胞計(jì)數(shù)與活率分析部分提供Cellometer品牌雙熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
 

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2. ELISPOT/FluoroSpot試劑盒
高品質(zhì)、穩(wěn)定且符合SOP生產(chǎn)流程的ELISPOT/FluoroSpot試劑盒是ELISPOT流程中關(guān)鍵的一環(huán)。
達(dá)科為公司不僅擁有自主研發(fā)的高品質(zhì)“達(dá)優(yōu)”品牌ELSIPOT試劑盒，同時(shí)與全球ELISPOT領(lǐng)域頂尖廠家合作，提供高品質(zhì)、多種屬、多規(guī)格的ELISPOT/FluoroSpot試劑盒，以滿足不同用戶需求。

 

 
3. 斑點(diǎn)計(jì)數(shù)和數(shù)據(jù)分析
斑點(diǎn)計(jì)數(shù)和數(shù)據(jù)分析是ELISPOT流程的最后一個(gè)環(huán)節(jié)，也是至關(guān)重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。要確保最后這一至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，首先就要保證讀板儀的自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，減少對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員經(jīng)驗(yàn)的依賴，降低主觀因素的干擾。

Mabtech公司本身作為全球最大ELISPOT讀板儀用戶，不滿足于市面上現(xiàn)有的讀板儀主觀性過強(qiáng)、過于依賴操作員經(jīng)驗(yàn)、操作繁瑣復(fù)雜且數(shù)據(jù)結(jié)果重復(fù)性、一致性差的現(xiàn)狀，自主研發(fā)推出了新一代的高端型號(hào)IRIS ELISPOT/FluoroSpot讀板儀與基礎(chǔ)型ASTOR ELISPOT讀板儀，顛覆了斑點(diǎn)計(jì)數(shù)算法，推出RAWspot技術(shù)，自動(dòng)定位，自動(dòng)較準(zhǔn)，固定焦距，實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)客觀標(biāo)準(zhǔn)化，操作簡便人性化，是一款真正意義上的科學(xué)家為科學(xué)家設(shè)計(jì)/用戶為用戶設(shè)計(jì)的新一代讀板儀。
 

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4. 實(shí)驗(yàn)人員培訓(xùn)
前面已經(jīng)提到，ELISPOT操作流程涉及因素較多，同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)技能也有一定要求。為了確保ELISPOT流程的標(biāo)準(zhǔn)化，實(shí)驗(yàn)人員的技能培訓(xùn)是必不可少的環(huán)節(jié)。
達(dá)科為作為最早引入ELISPOT技術(shù)的生物公司，以普及ELISPOT技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)化為己任，在國內(nèi)舉辦了多場ELISPOT技術(shù)培訓(xùn)班，從技術(shù)理論到實(shí)驗(yàn)實(shí)操，讓更多實(shí)驗(yàn)人員系統(tǒng)地學(xué)習(xí)、掌握ELISPOT技術(shù)。
 

5. ELISPOT項(xiàng)目服務(wù)平臺(tái)
如果您的實(shí)驗(yàn)室還沒有具備開展ELISPOT項(xiàng)目的條件，達(dá)科為旗下行健雅生物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)擁有強(qiáng)大的專業(yè)技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)，可以為您提供讀板服務(wù)和項(xiàng)目。
 

 
 

6. ELISPOT技術(shù)手冊(cè)


達(dá)科為自2005年編纂國內(nèi)第一本《ELISPOT技術(shù)手冊(cè)》以來，不斷改進(jìn)優(yōu)化手冊(cè)內(nèi)容，現(xiàn)已修訂至第六版，全國發(fā)行量超3萬多冊(cè)！
《ELISPOT技術(shù)手冊(cè)》內(nèi)容覆蓋ELISPOT/FluoroSpot技術(shù)原理/歷史以及發(fā)展?fàn)顩r；詳細(xì)描述了ELISPOT實(shí)驗(yàn)的整個(gè)操作流程以及與ELISPOT實(shí)驗(yàn)相關(guān)的一系列技術(shù)；分析了ELISPOT實(shí)驗(yàn)中常見問題及解決方案；談及了ELISPOT讀板儀的發(fā)展史和數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析；也總結(jié)了ELISPOT流程的標(biāo)準(zhǔn)化與質(zhì)量控制環(huán)節(jié)；最后講述了ELISPOT技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域和展望。
這不折不扣的是一本ELISPOT屆的“武功秘笈”，值得擁有和私藏！

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ELISPOT實(shí)驗(yàn)從樣本制備到最后的數(shù)據(jù)分析，以及技術(shù)服務(wù)和技術(shù)培訓(xùn)班，每個(gè)環(huán)節(jié)達(dá)科為都能提供相應(yīng)的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品與專業(yè)服務(wù)。
 

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