THP-1細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)與要點(diǎn)
該細(xì)胞從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化；可作為轉(zhuǎn)染宿主。
細(xì)胞名稱：人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞細(xì)胞簡稱：THP-1
細(xì)胞別名：THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); O-THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1
產(chǎn)品貨號(hào)：TCH-C361
細(xì)胞形態(tài)：單核細(xì)胞樣
生長特性：懸浮生長
培養(yǎng)體系：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S
THP-1細(xì)胞培養(yǎng)注意要點(diǎn)
➊ THP-1細(xì)胞為懸浮生長，部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，部分細(xì)胞分散。
➋ THP-1細(xì)胞更喜歡酸性環(huán)境，在偏酸性環(huán)境中，THP-1生長更快，所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時(shí)，是適合細(xì)胞生長的，此時(shí)補(bǔ)液或半換液即可。
➌ THP-1細(xì)胞有密度依賴性，THP-1細(xì)胞密度低時(shí)，生長較慢，培養(yǎng)密度維持在4 ~8×105 /mL為宜；超過2.0 ×106 /mL則需要傳代。
➍ THP-1細(xì)胞對(duì)機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量避免吹打力道過大。暴力吹打會(huì)使細(xì)胞分化和死細(xì)胞增加。
➎ 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
THP-1細(xì)胞換液
➊ 補(bǔ)液法：培養(yǎng)基變黃時(shí)可補(bǔ)加適量（1~2mL）新鮮培養(yǎng)基，補(bǔ)加1-2次之后，用離心的方式全部換液，離心1200rpm （約250g）3分鐘。
➋ 半換液法：以T25瓶子為例，瓶子里裝有5mL培養(yǎng)基。豎起瓶子靜置一段時(shí)間，待細(xì)胞沉底，小心吸出2.5mL的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管，離心1200rpm （約250g）3分鐘，檢查有沒有沉淀，以免損失細(xì)胞；原瓶補(bǔ)充2.5mL新鮮培養(yǎng)基，離心管里若有細(xì)胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶。➌ 如果換液后第二天培養(yǎng)基就變得很黃，同時(shí)鏡下檢查未污染，說明細(xì)胞密度大，應(yīng)該傳代。
THP-1細(xì)胞傳代
➊ 搖晃培養(yǎng)瓶，把細(xì)胞搖勻，均分到兩個(gè)瓶子里，每瓶再補(bǔ)充等量培養(yǎng)基。
➋ 離心法：離心后計(jì)數(shù)，按照40-50萬細(xì)胞/mL的密度接種到T25瓶里，瓶中培養(yǎng)基量以5mL為宜。不方便計(jì)數(shù)時(shí)，按1:2比例傳代。➌ 死細(xì)胞或細(xì)胞碎片較多的情況下，建議用離心法傳代，離心轉(zhuǎn)速可適當(dāng)降低（推薦800~1000rpm或160~200g）。
THP-1細(xì)胞凍存
➊ 由于THP-1是懸浮細(xì)胞，更易受到凍存影響，建議加大凍存密度，大約200萬-300萬/mL為宜，以提高復(fù)蘇存活率。➋ THP-1細(xì)胞對(duì)凍存溫度比較敏感，建議凍存后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱，長期保存應(yīng)放在液氮罐中。
➌ 經(jīng)測試，THP-1使用非程序降溫凍存液的復(fù)蘇存活率高于程序降溫凍存液，推薦使用HyCyte™一步凍存液（GUCP-R201）。
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài)，建議復(fù)蘇后48小時(shí)內(nèi)不要進(jìn)行操作。
THP-1培養(yǎng)常見問題及解決方法
➊ 培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇（ β-mercaptoethanol）嗎？
β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對(duì)THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時(shí)，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。
➋ 懸浮細(xì)胞在鏡下觀察時(shí)，難以聚焦或估算密度怎么辦？
懸浮細(xì)胞會(huì)隨著液體流動(dòng)，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細(xì)胞沉底，之后再輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細(xì)胞密度。
➌ THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？
少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正�，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團(tuán)問題。不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時(shí)，會(huì)自己分散開。
➍ THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？
少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞的比例高于20%，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。
