細胞中的小黑點是如何產(chǎn)生的？如何避免？

在正常培養(yǎng)細胞的情況下，我們時常會發(fā)現(xiàn)細胞出現(xiàn)一些小黑點，有些小黑點隨著細胞數(shù)量的增長而增長，有一些則不會，那么這些小黑點到底是什么？會影響細胞增長嗎？

| 細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的小黑點可以分為以下幾類：

1. 細胞碎片 
在細胞培養(yǎng)中不合適操作引起的化學(xué)或物理上的刺激，例如胰酶消化時間過長，會導(dǎo)致細胞死亡，從而產(chǎn)生很多碎片。

2. 凋亡小體 
在體外培養(yǎng)條件下，細胞很容易受到環(huán)境改變的影響，誘發(fā)細胞的凋亡，產(chǎn)生凋亡小體。

3. 血清中的沉淀
經(jīng)過熱處理的血清中，作為常見沉淀物質(zhì)的磷酸鈣會顯著增多，且由于布朗運動會看上去可以活動。

4. 支原體污染
由于支原體的污染，導(dǎo)致出現(xiàn)的小黑點，明顯影響細胞增長。

| 細胞培養(yǎng)過程中如何避免產(chǎn)生小黑點？

懸浮細胞：
收集細胞上清慢速離心（500~600 rpm/min，5~6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶。
貼壁細胞：
將細胞用 PBS 洗 2~3 遍，洗的時候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去 PBS，消化時先加低濃度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右，讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細胞，將收集的細胞懸液慢速離心（500~600 rpm/min，5~6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養(yǎng)。

如果懷疑黑點是支原體污染，可進行支原體檢測，檢測陽性請及時將細胞處理后丟棄。比較珍貴的細胞，可以嘗試使用支原體清除劑去除，并與其他細胞分開培養(yǎng)。

| 注意事項：

1. 掌握細胞傳代的最佳時機，不要細胞長老了再傳代；
2. 掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片；
3. 減少血清等試劑的凍融次數(shù)；
4. 將培養(yǎng)液的 PH 調(diào)到最佳；
5. 嚴格控制水質(zhì)和器皿的清潔。