腦立體定位在側(cè)腦室構(gòu)建癲癇大鼠模型的KA最佳劑量探索的應(yīng)用

海人酸(kaimic acid, KA)是一 種興奮性氨基酸結(jié)構(gòu)類似物，可誘導(dǎo)神經(jīng)興奮毒性，造成神經(jīng)元細(xì)胞死亡，KA模型是模擬人類顳葉癲癇較為理想的動(dòng)物模型，具有長(zhǎng)期的癲癇敏感性，能很好的模擬人類的顳葉癲癇,具有與人類癲癇相似的病理改變和腦電圖改變，而且具有與人類相似的臨床表現(xiàn)，所以KA誘發(fā)的癲癇動(dòng)物模型被國(guó)內(nèi)外廣泛的用于癲癇疾病的實(shí)驗(yàn)研究中。
 

當(dāng)KA注射劑量過(guò)大時(shí)死亡率較高，劑量過(guò)低時(shí)不足以誘發(fā)癲癇發(fā)作以及形成明顯的癇后腦損傷，腦內(nèi)局部給藥相比全身給藥可以省去血-腦脊液屏障的阻隔、減少藥物使用量，還可以減少干擾，所以研究者選擇腦立體定位局部注射KA來(lái)制造癲癇模型，通過(guò)比較不同劑量KA致癇模型的實(shí)驗(yàn)效果，探索一個(gè)合適的注射劑量，為后期的應(yīng)用腦立體定位側(cè)腦室注射KA構(gòu)建癲癇大鼠模型的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供參考。

首先將大鼠麻醉固定于腦立體定位儀，參照大鼠腦立體定位圖譜,選擇大鼠右側(cè)側(cè)腦室注射,坐標(biāo)位置為前囟后1.0mm，中線向右旁開(kāi)1.5mm，硬腦膜下4.5mm。KA劑量組使用微量注射器分別注射KA  0.5 μg、1 μg、1.5 μg和2 μg (用生理鹽水配制為1 μl), 正常組注射1 μl 生理鹽水，10 min內(nèi)勻速注射完。
 

觀察ＫＡ致癇大鼠的行為學(xué)，并對(duì)大鼠癇性發(fā)作強(qiáng)度進(jìn)行驚厥分級(jí)，大鼠造模后第1~7天觀察各組大鼠的一般狀況以及Racine分級(jí),記錄動(dòng)物死亡數(shù), 統(tǒng)計(jì)造模成功率。
 

大鼠造模后第8天，開(kāi)始進(jìn)行Morris水迷宮行為學(xué)觀察，選擇將站臺(tái)放在第三象限中間，水溫維持在（25士1）℃,實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行6d,包括定位航行試驗(yàn)和空間搜索試驗(yàn)。造模后第8~12天的定位航行是把大鼠依次從除第三象限外的其他三個(gè)象限面朝池壁放入水池中，記錄每次大鼠找到隱藏在水面下平臺(tái)并爬上平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)�？臻g探索試驗(yàn)是在造模后第13天時(shí)撤去平臺(tái)，然后選擇第一象限將大鼠放入水池中，記錄大鼠在60s內(nèi)在目標(biāo)象限游泳時(shí)間以及通過(guò)平臺(tái)原先位置的次數(shù)。

大鼠于造模第14天經(jīng)苯巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，取腦組織在顯微鏡下觀察海馬的病理學(xué)形態(tài)及神經(jīng)元的缺失情況并照相 。

結(jié)果：

①與正常組比較，注射不同劑量KA模型組均可導(dǎo)致不同程度的腦損傷，KA  1 μg劑量組的造模成功率高于其他各組(P<0.005)。水迷宮實(shí)驗(yàn)在定位航行實(shí)驗(yàn)中，1 μg以上的各劑量組和正常組比較，第4、5天逃避潛伏期出現(xiàn)明顯的延長(zhǎng)(P<0.05)，在空間探索實(shí)驗(yàn)中，1 μg以上的各劑量組和正常組比較，穿越原平臺(tái)位置次數(shù)明顯減少( P<0.05 );

②與正常組比較, 1 μg以上的各劑量組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元均出現(xiàn)明顯損傷( P<0.05),大鼠海馬區(qū)MAP2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)降低(P<0.05)。

結(jié)論：KA 1 μg以上的各劑量組相比正常組海馬區(qū)均有不同程度的損傷，但從大鼠的造模成功率相比，注射1 μg比其他組有較大優(yōu)勢(shì)，所以將癲癇模型腦內(nèi)注射KA的最佳劑量選定為1 μg,為癲癇動(dòng)物模型的制備提供參考依據(jù)。

文獻(xiàn)來(lái)源：郭振宇、胡蝶、黃鳳等.腦與神經(jīng)疾病雜志2022年第30卷第7期

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