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熒光原位雜交技術(shù)原理及應(yīng)用

瀏覽次數(shù):1287 發(fā)布日期:2023-3-21  來源:自然基因
       熒光原位雜交技術(shù)技術(shù)原理是將熒光素直接或間接標(biāo)記的核酸探針[或生物素、地高辛、dinit rophenyl(I)NP)、aminoacetylAAFfluorine(AAF)等標(biāo)記的核酸探針與待測樣本中的核酸序列按照堿基互補配對的原則進(jìn)行雜交,經(jīng)洗滌后直接在熒光顯微鏡下觀察。 
 
       熒光原位雜交技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù),原理是利用報告分子(如生物素、地高辛等)標(biāo)記核酸探針,然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交,若兩者同源互補,即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。此時可利用該報告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng),經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待DNA進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。

熒光原位雜交技術(shù)優(yōu)點
熒光原位雜交與其他原位雜交技術(shù)相比,熒光原位雜交具有很多優(yōu)點,主要體現(xiàn)在:
①FISH不需要放射性同位素標(biāo)記,更經(jīng)濟(jì)安全。
②FISH的實驗周期短,探針穩(wěn)定性高,特異性好,定位準(zhǔn)確,能迅速得到結(jié)果。
③FISH通過多次免疫化學(xué)反應(yīng),使雜交信號增強(qiáng),靈敏度提高,其靈敏度與放射性探針相當(dāng)。
④多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列。
⑤熒光原位雜交既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化。也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。
 
熒光原位雜交技術(shù)應(yīng)用
熒光原位雜交技術(shù)在基因定性、定量,整合、表達(dá)等方面的研究中頗具優(yōu)勢,目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于遺傳病診斷、病毒感染分析、產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組研究等許多領(lǐng)域,在臨床檢驗、教學(xué)和研究等方面扮演著重要的角色。

 
基因(或DNA片段)染色體定位和基因圖譜繪制
熒光原位雜交目前應(yīng)用的基因定位的主要方法是FISH。分離到的DNA序列直接通過FISH,同時采用多種顏色熒光素的標(biāo)記探針,結(jié)合中期染色體和間期細(xì)胞方面的信息,可快速確定一-系列DNA序列之間的相互次序和距離,完成基因制圖。用不同顏色炎光索標(biāo)記2個不同的DNA鏈,而且他們在染色體上的距離大于1Mbp時,可以依據(jù)不同探針信號的排列關(guān)系分辨他們在染色體上的順序。
 
若采用5-溴脫氧尿嘧啶( 5-Burd )處理細(xì)胞,能夠獲得高分辨顯帶的染色體,提高DNA鏈標(biāo)記到染色體上的分班能力。如使用間期細(xì)胞,2個DNA鏈的距離可以縮短至50kb,這個間距是染色體上分辨距離的1/20,不同探針的次序可以通過測量間期細(xì)胞的距離來確定。確定DNA鏈在染色體上的精細(xì)位置適用于檢在某些特殊的染色休易位和缺失。標(biāo)記同一-DNA鏈與不同種屬細(xì)胞的染色體雜交,可以找出不同種屬之間的同源基因以及基因在染色體上的位置,從而了解種屬之間的進(jìn)化關(guān)系。

 

IMSTAR是Françoise Soussaline博士于1985年創(chuàng)立于法國巴黎,致力于發(fā)展圖像學(xué)分析設(shè)備,上世紀(jì)90年代初開始全面研發(fā)智能全自動臨床圖像分析設(shè)備,目前已經(jīng)發(fā)展到第六代產(chǎn)品,是世界上最為先進(jìn)的臨床圖像設(shè)備之一,也是全球唯一的可以實現(xiàn)智能全自動分析的系統(tǒng),在生命科學(xué)智能圖像分析系統(tǒng)領(lǐng)域處于絕對領(lǐng)導(dǎo)地位已經(jīng)長達(dá)10年。
 
IMSTAR旗下產(chǎn)品涉及組織學(xué)、病理學(xué)、分子學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)等方面,在細(xì)胞遺傳方面主打產(chǎn)品為CYTOSTAR,其中包括和染色體核型分析、FISH、mFISH、CGH、HER2/Neu、熒光計數(shù)、中期/間期腫瘤診斷NFR、核DNA含量PM、有絲分裂指數(shù)MI、Rare Cells、慧星、微核、APO動力學(xué)等,并可以為客戶量身定做所需分析系統(tǒng)。
來源:自然基因有限公司
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E-mail:info@naturegene.com

標(biāo)簽: 原位雜交儀 FISH
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