瓊脂糖凝膠電泳中影響凝膠聚合的因素

對于一般的分析工作，特別是定量分析工作來講，人們強調制備的凝膠要有很好的可 重復性。如果制備得到的凝膠本身沒有重復性，比如孔徑前后兩次凝膠相差頗大，那么在 這樣的條件下，所得到的分析結果，其可信性就有問題，往往會使幾次結果不能重復。所 以，為了要獲得可靠的分析結果，在制膠時對能影響凝膠聚合的種種因素必須加以控制。 有哪些主要因素，又怎樣來控制它們的條件，簡述如下：

(1) 制備凝膠用的主要試劑

• 丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺至少是分析純級的試劑。存放時間一般不超過1年, 如果存放時間過長，丙烯酰胺受潮水解，丙烯酸含量增多。若利用它為單體,聚合時孔徑很 不均一，表現(xiàn)現(xiàn)象是聚合時間延長，甚至很難聚合，這就必須重結晶。對于定量分析工作一 般都要求對單體進行重結晶。

丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺應放在棕色瓶屮，干燥，低溫( + 4C)條件下保存。丙烯酰 胺經(jīng)陽光照射，自身會聚合成長鏈，酰胺基也會縮合形成亞胺橋,從而影響交聯(lián)結果。
配制成的貯存液，也應盛于棕色瓶中，于+ 4 C保存，時間不超過1個月。

• TEMED應密封置于冰箱中貯存，使用的量應使凝膠能在30〜60分鐘內聚合完 成，如前述不再重復。
• 過硫酸鉉應在臨用前配制。配制好的溶液應在冰箱中存放,使用期不超過1星 期。存放1星期后的過硫酸鉉，可能仍會起作用，但不適用來作精細的分析工作。

(2) 溫度
必須保持聚合溫度的恒定。聚合速度與溫度有關，一般是溫度高聚合快，而聚合的快 慢影響交聯(lián)孔徑的大小，所以，必須保持恒定溫度。通常都固定在與電泳相同的溫度。凝 膠的聚合反應是一個放熱反應，所以必須有效地散熱。一般用薄壁玻璃管在流通空氣中進 行凝膠聚合，便能達到散熱的目的°

(3) 氧氣
氧是凝膠鏈合成反應的終止劑。所以，制膠前必須充分抽氣，使0₂降低到一定水平 以下或者充以惰性氣體,如氧氣來降低0₂的含量。

(4) 光照
光照的時間和強度都和凝膠的聚合速度有關。因此，必須固定光源強度、光照距離和 光照時間。
注意和控制好以上幾點,制備得到的凝膠其可重復性的程度就高。