間充質(zhì)干細胞成脂誘導(dǎo)方法介紹

        干細胞是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細胞，未充分分化尚不成熟，在一定條件下可以分化成多種功能細胞。脂肪干細胞是從脂肪中分離得到的多分化潛能的干細胞，通過一定條件培養(yǎng)可以生長為成熟的脂肪細胞產(chǎn)生脂滴，為科研工作者研究脂肪相關(guān)課題提供良好的細胞模型，目前此模型應(yīng)用廣泛，相關(guān)機制研究也非常多。
目前已發(fā)表研究發(fā)現(xiàn)，脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)成脂過程的方法有2種：

1. 地塞米松、胰島素以及IBMX等試劑配制的溶液進行間斷培養(yǎng)；
2. 商業(yè)化的成品成脂誘導(dǎo)試劑盒，其中包括了分化培養(yǎng)基維持液和分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液；

上述2種方式均可誘導(dǎo)干細胞形成脂滴，一般需要14-21天，最終以油紅O染色判斷脂滴形成情況。
 
實驗應(yīng)用：
（1）肥胖與代謝疾病研究：成脂誘導(dǎo)實驗可以用于研究肥胖和相關(guān)代謝疾病的發(fā)生機制，如糖尿病、高血壓等。通過觀察和分析脂肪細胞的發(fā)育和功能變化，可以揭示這些疾病的潛在機制。
（2）藥物篩選：成脂誘導(dǎo)實驗可以用于篩選潛在的抗肥胖藥物或改善代謝疾病的藥物。通過觀察藥物對脂肪細胞發(fā)育和功能的影響，評估其藥效和作用機制。
（3）營養(yǎng)與健康研究：成脂誘導(dǎo)實驗可以用于研究不同營養(yǎng)因子和環(huán)境因素對脂肪細胞發(fā)育和代謝的影響，探究營養(yǎng)與健康之間的關(guān)系。
總之，成脂誘導(dǎo)實驗在肥胖、代謝疾病、藥物研發(fā)和營養(yǎng)健康等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
 
 
實驗步驟：以成品商業(yè)化誘導(dǎo)試劑盒步驟為例
（1）加 1 mL 0.1%明膠到六孔板中，搖勻，使其能均勻覆蓋各孔底面。
（2）將鋪有0.1%明膠的六孔板放置在超凈臺或 CO2 培養(yǎng)箱至少 30 min。
（3）30 min后吸去明膠即可用于接種細胞，或等待六孔板晾干再接種。
（4）將待誘導(dǎo)的大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞按照 2×104 cells/cm2 的細胞密度接種于六孔板中，每孔加入 2mL 普通完全培養(yǎng)基。
（5）細胞置于 37℃、5%CO2、飽和濕度的 CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
（6）當(dāng)細胞匯合度達到 100%時，小心地將孔內(nèi)完全培養(yǎng)基吸走，向六孔板中加入 2 mL 成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。
（7）誘導(dǎo) 3 天后，吸去六孔板中的 A 液，加入 2 mL分化培養(yǎng)基維持液；
（8）維持 1 天后，吸去維持液，換回誘導(dǎo)液進行誘導(dǎo)。
（9）維持液和誘導(dǎo)液交替使用，期間需每天觀察細胞狀態(tài)。重復(fù)誘導(dǎo)和維持過程，直到出現(xiàn)足量、大小適宜的脂滴，即可準(zhǔn)備染色。