PBMC在免疫治療藥物研發(fā)中的應用熱點問題解答

—熱點問題—

第一題    CD4+T細胞加普通培養(yǎng)基可以培養(yǎng)幾天？

​經(jīng)多次驗證，分選后的CD細胞在普通培養(yǎng)基中僅能維持24~48小時，且隨著時間的延長細胞活力和狀態(tài)都在不斷的下降。

第二題    PBMC可以在體外擴增嗎？

PBMC在沒有相關細胞因子存在情況下不能擴增。由于PBMC是一群混合細胞，即使添加了細胞因子也只能是某些亞型細胞的擴增，最終導致PBMC細胞組成比例發(fā)生改變。

第三題    分選后的細胞想要培養(yǎng)，應該選擇什么培養(yǎng)基？普通1640是否可以？

不同亞型免疫細胞擴增需要在基礎培養(yǎng)基中添加不同的細胞因子或細胞因子組合，基礎培養(yǎng)基可選用1640培養(yǎng)基。為滿足客戶的不同需求，IPHASE正在陸續(xù)推出不同亞型細胞的擴增、分化培養(yǎng)基，敬請期待！

第四題    凍存PBMC，復蘇后細胞亞群比例會改變么？

凍存PBMC復蘇后細胞亞群比例是否改變與凍存液的凍存效果有關。凍存效果好的凍存液細胞凍存復蘇后活率高，則細胞亞群比例不會發(fā)生顯著改變。IPHASE推出的PBMC凍存液細胞復蘇后活率＞90%，完全滿足后續(xù)實驗要求。

第五題    陽選，陰選，適配體分選如何選擇？

若靶抗原與磁珠偶聯(lián)抗體的持續(xù)結合不影響后續(xù)實驗，比如分選細胞用于RNA或蛋白的提取，則可以考慮陽選試劑盒。反之，則需要選擇陰選或IPHASE的適配體無痕分選試劑盒。IPHASE適配體無痕分選試劑盒分選后純度＞95%，且細胞不帶磁珠和與靶抗原結合的適配體分子，兼具有陽選試劑盒和陰選試劑盒的優(yōu)點。

第六題    凍存PBMC能用于細胞分選試驗嗎？

IPHASE推出的分選試劑盒均可用于凍存PBMC的細胞分選。

第七題    我公司最近想開發(fā)PBMC質(zhì)控品，想尋找一款凍存效果較好的凍存液，有推薦嗎？

IPHASE無血清細胞凍存液適用于您的需求，細胞復蘇存活率＞90%，得率＞85%，復蘇后細胞亞群比例不發(fā)生改變。

第八題    通過陽性分選試劑盒得到的細胞是否可通過流式細胞儀進行檢測？

通過陽性分選的方法得到的細胞與磁珠連接，但所使用磁珠為納米磁珠，理論上不影響流式細胞儀的檢測。如有疑慮，可嘗試使用培養(yǎng)外加反復吹吸的方式使得細胞和磁珠脫離后再進行流式檢測。需注意的是，流式抗體選擇請嚴格參照產(chǎn)品說明。

第九題    IPHASE的人PBMC進行HLA分型鑒定嗎？IPHASE的人PBMC供體庫有多大？

IPHASE的人PBMC均進行了HLA分型鑒定。IPHASE的人PBMC供體庫目前有近百個donor，庫容量正在逐漸增加，客戶可以從我們?nèi)薖BMC供體庫中選擇適合自己實驗的PBMC。

第十題    凍存PBMC復蘇操作上應注意哪些細節(jié)？

首先，需要37℃預熱復蘇培養(yǎng)基。其次，水浴解凍細胞時要注意管內(nèi)細胞融化狀態(tài)，當融化至少量冰晶時終止水浴。最后，離心力、離心時間需按隨貨說明書建議進行參數(shù)設置。

十一題    IPHASE人CD3/CD28+T細胞活化擴增試劑盒刺激細胞擴增最長時間是多少？

IPHASE人CD3/CD28+T細胞活化擴增試劑盒刺激細胞擴增我們只驗證到15天，擴增效率超千倍，此時細胞仍保持良好狀態(tài)，完全可以進一步延長時間進行擴增培養(yǎng)。

十二題    ​IPHASE提供的凍存人PBMC細胞有哪些規(guī)格？

IPHASE可提供凍存、新鮮兩種狀態(tài)的細胞，且包含5million/支，10 million/支，50 million/支等多種規(guī)格。