關(guān)于適體（Aptamer）篩選技術(shù)的相關(guān)問題介紹

1.核酸適配體相對(duì)于抗體有何優(yōu)勢(shì)？

        適配體的篩選周期短、工作濃度低、批次差異性小、放大工藝簡(jiǎn)單、成本低、穩(wěn)定易保存，并且可以常溫運(yùn)輸，適合于毒素和低免疫原性抗原。

2. 磁珠方法篩選適配體，磁珠是一起加入到PCR體系中嗎？對(duì)PCR的有什么影響嗎？

        一個(gè)簡(jiǎn)單的判斷是如果加到PCR mix中，肉眼不可見磁珠的顏色，影響應(yīng)該是不大的，如果磁珠的量過多，肉眼可以看到mix中渾濁的顏色，那樣會(huì)對(duì)PCR過程產(chǎn)生抑制。

3. 一開始沒有什么引物二聚體，忽然從中間幾輪開始引物二聚體特別多，連初始文庫(kù)PCR出來(lái)，引物二聚體也是比較多，不知道錯(cuò)在哪里了？

        有可能后來(lái)出現(xiàn)了氣溶膠污染。

4. 核酸適配體有動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)嗎，比如高親和力的反應(yīng)速率比低親和力的反應(yīng)快？
       
         有這個(gè)特點(diǎn)。但是篩選中要注意的是第一輪篩選的時(shí)候，基本都是單拷貝，即使是高親和力的也不一定保留下來(lái)，因?yàn)榈陀H和力的還是更多的。所以第一輪篩選建議是盡量孵育時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)，讓能結(jié)合的盡量能結(jié)合并保留下來(lái)。

5. SELEX的難點(diǎn)在哪里？
       
         主要是難在后期的鑒定。獲得文庫(kù)之后并不代表實(shí)驗(yàn)已經(jīng)成功，還需要從文庫(kù)當(dāng)中去找到真正能夠結(jié)合的單一序列。從測(cè)序、分析、挑選系列到合成，再到后面的鑒定要重復(fù)驗(yàn)證，而這個(gè)過程是非常的漫長(zhǎng)，并且后期的成本高于前期成本。

6. 按照做抗體的方法做核酸適配體的應(yīng)用為什么行不通？

         核酸適配體結(jié)合到表面之后，它的構(gòu)象會(huì)發(fā)生改變，而這種變化就會(huì)導(dǎo)致它不能夠再像在溶液中一樣正確識(shí)別靶標(biāo)分子。核酸適配體的結(jié)構(gòu)的柔性比蛋白質(zhì)更大，更容易發(fā)生結(jié)構(gòu)的變化。

7. 核酸適配體與靶標(biāo)相互作用的作用力是什么？

        適配體可以形成多種結(jié)構(gòu)形狀，例如發(fā)夾，凸起，假結(jié)和G-四鏈體。它們可通過氫鍵，靜電相互作用，疏水作用，π-π堆積，范德華力，或這些不同的力的組合與靶分子發(fā)生相互作用。