Celloger®活細(xì)胞成像系統(tǒng)應(yīng)用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染研究

 
    細(xì)胞轉(zhuǎn)染可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染并不會將外源DNA/RNA整合到宿主細(xì)胞基因組中，因此只持續(xù)幾天，多在轉(zhuǎn)染24-72h后分析結(jié)果，多用于研究敲入/敲除特定基因的影響。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指通過將外源DNA/RNA整合到宿主核基因組中或?qū)⒂坞x載體作為染色體外元件在宿主細(xì)胞核中維持轉(zhuǎn)基因的長期表達(dá)，并可傳遞至轉(zhuǎn)染細(xì)胞的子代[1]。在細(xì)胞轉(zhuǎn)染后通常需要通過一些選擇性標(biāo)記來篩選以得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。
   
根據(jù)轉(zhuǎn)染方法可以分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)。

• 物理介導(dǎo)：在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導(dǎo)入DNA，如電穿孔法。
• 化學(xué)介導(dǎo)：利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷，如陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、磷酸鈣共沉淀法等。
• 生物介導(dǎo)：利用基因工程病毒轉(zhuǎn)染非病毒基因到細(xì)胞中，如病毒感染。

目前實(shí)驗(yàn)室最常用的轉(zhuǎn)染方法為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。  
    細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本流程為：細(xì)胞鋪板→轉(zhuǎn)染前細(xì)胞清洗→配制轉(zhuǎn)染試劑→轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞混合→觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。細(xì)胞轉(zhuǎn)染常規(guī)易操作，但是轉(zhuǎn)染效率卻并不能一直符合期望，這是因?yàn)榧?xì)胞轉(zhuǎn)染受到影響的因素多樣，如細(xì)胞生長狀態(tài)與密度、培養(yǎng)基、載體大小等。
    那么是否有工具能實(shí)時監(jiān)測細(xì)胞的狀態(tài)與密度，確定最佳轉(zhuǎn)染時間以及用于后續(xù)轉(zhuǎn)染效率的測定呢？
    Celloger^®活細(xì)胞成像系統(tǒng)可以很好地應(yīng)用于確定細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率或監(jiān)測轉(zhuǎn)染的效果。Celloger^®系列儀器體積小巧，可以放置在多種細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，并且可以承受自生熱量，實(shí)現(xiàn)長期細(xì)胞成像。Celloger^®系列優(yōu)化了熒光濾光片和光路，可以以最小的光強(qiáng)實(shí)時獲得清晰的活細(xì)胞明場圖像和熒光圖像，極大程度地降低細(xì)胞光毒性。Celloger^®系列產(chǎn)品包括Celloger^® Nano、Celloger^® Mini Plus、 Celloger^® Pro以及Celloger^® Stack，可根據(jù)自己的需求選擇需要的產(chǎn)品（圖3）。 應(yīng)用實(shí)例：Celloger^® Nano觀察轉(zhuǎn)染效率
    通過 Celloger^® Nano，在4×物鏡綠色熒光通道下，每隔 2 小時觀察轉(zhuǎn)染pCMV-GFP載體的HeLa 細(xì)胞中綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)情況，共計(jì)觀察時間40小時。
結(jié)果表明綠色熒光蛋白從轉(zhuǎn)染后4小時開始表達(dá)，并一直維持到轉(zhuǎn)染后16 小時（圖 4）。
結(jié)語：
    光毒性是活細(xì)胞成像的優(yōu)先考慮因素。Celloger^®系列提高了熒光成像的效率，即使在最低水平的激發(fā)光下也能進(jìn)行熒光成像，這可以減少熒光引起的光毒性。用于執(zhí)行上述應(yīng)用程序的Celloger^®系統(tǒng)可以在培養(yǎng)箱內(nèi)完美工作，這使其成為各種成像應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)的理想工具。

參考文獻(xiàn)：
[1] Chong ZX, Yeap SK, Ho WY. Transfection types, methods and strategies: a technical review. PeerJ. 2021 Apr 21;9:e11165.
[2] Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future. Anal Bioanal Chem. 2010 Aug;397(8):3173-8.