全自動高通量蛋白純化方案

高通量磁珠法蛋白純化模塊可以通過結(jié)合核酸/蛋白提取儀實現(xiàn)極簡快速蛋白純化，也可以通過自動化液體工作站結(jié)合磁力架完成。使用該功能時僅需要通過軟件的簡易命令行即可完成，如圖3所示，工作站機械抓手會根據(jù)純化流程將Binding Buffer、Beads、Washing Buffer等試劑自動搬運到指定位置，使用磁套進行磁珠轉(zhuǎn)運，單次可以完成96個樣本純化，濃度穩(wěn)定在0.5-0.8mg/ml，96孔板純化時間約60min，節(jié)省槍頭成本，省時省力。

圖4 親和層析柱蛋白純化法實驗流程

RoboColumn是一種小型色譜柱，用于抗體、蛋白質(zhì)、多肽等的全自動平行色譜分離，其純化流程如圖4所示。高通量的RoboColumn ALP 與Biomek i系列液體工作站相結(jié)合，配置Span8固定針，可實現(xiàn)多通道自動化的平行層析實驗流程，顯著縮短工藝開發(fā)時間；同時還可以進行數(shù)據(jù)追蹤，實現(xiàn)樣本溯源，減少重復(fù)工作。

圖5 RoboColumn ALP模塊結(jié)構(gòu)及Span8固定針示意圖

W1：廢液槽；B1：收集板載架；C1：柱載架

Biomek液體工作站可以實現(xiàn)臺面整合RoboColumn ALP模塊，通過軟件流程式編輯方法，控制ALP板位自動位移，實現(xiàn)液體收集，輕松完成蛋白純化，圖6展示了軟件控制ALP板位收集液體的方法以及RoboColumn純化結(jié)果，實驗中1.56mg蛋白上樣，經(jīng)0.1M Gly-HCl(pH2.7)洗脫回收得到蛋白含量1.31mg，純化得率達到84%，8通道操作時間約為80min。

圖6 調(diào)用RoboColumn方法界面及純化結(jié)果展示

圖7 PhyTip法自動化純化關(guān)鍵流程

PhyTip為槍頭式分散固相親和色譜柱，采用槍頭式裝置，純化樹脂被填充于槍頭尖端，由自動化液體處理工作站加載PhyTip，可以實現(xiàn)單通道到96通道靈活樣品數(shù)純化，其純化流程如圖7所示，可對微克級到毫克級的蛋白進行純化。
 

圖8 PhyTip實物圖、PhyTip純化方法及結(jié)果展示圖

Biomek液體工作站與槍頭式純化色譜柱相結(jié)合，利用工作站加載PhyTip讓純化流程變得如移液流程一樣簡單！如圖8所示，加樣器加載PhyTip，分別在平衡液、蛋白樣品、洗雜液和洗脫液中混勻即可完成高通量蛋白純化，單次可處理96個樣品，收集10mL菌液使用PhyTip(40uL填料)，純化后經(jīng)BCA蛋白定量測定蛋白含量穩(wěn)定在400ug左右，優(yōu)于手工對照實驗340ug的結(jié)果，96孔板操作時間約為90min。

小 結(jié)