微生物遺傳研究利器Tn-Seq轉(zhuǎn)座子測序技術(shù)的介紹與技術(shù)流程

轉(zhuǎn)座子測序簡介
轉(zhuǎn)座子(transposon,Tn)是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和位移的基本單位，在細(xì)菌的染色體、質(zhì)�；蚴删�體之間可以自行移動，通過切割、整合等過程從基因組的一個位置“跳躍”至另一位置。當(dāng)轉(zhuǎn)座子插入某段基因時，該基因的功能將被破壞，基于這樣的特點(diǎn)，轉(zhuǎn)座子經(jīng)常被用于插入突變的實(shí)驗(yàn)中。轉(zhuǎn)座子測序(transposon sequencing，Tn-seq)技術(shù)結(jié)合了轉(zhuǎn)座子插入誘變和二代測序技術(shù)，常被用于細(xì)菌基因功能的研究。

轉(zhuǎn)座子測序需要構(gòu)建一個轉(zhuǎn)座子插入文庫，其中大多數(shù)或所有非必需基因（non-essential genes）都包含插入物，然后在特定的體外或體內(nèi)（宿主感染）條件下培養(yǎng)。通過測序確定實(shí)驗(yàn)的開始和結(jié)束時種群中每個突變體的相對頻率。從這些數(shù)據(jù)可以量化每個基因在每種情況下的適應(yīng)性貢獻(xiàn)，分析出哪些基因是必需基因（essential genes）及推測基因與特定表型的相關(guān)性。例如，通過比較突變豐度來鑒定抗生素抗性基因。
 

Tn-seq測序原理和技術(shù)路線

自2009年首次報道Tn-seq技術(shù)以來，已開發(fā)了多種用于細(xì)菌的轉(zhuǎn)座子插入測序 (transposon insertion sequencing，TIS) 方法，包括插入測序(insertion sequencing，INSeq)、高通量插入軌跡深度測序(high throughputs insertion tracking by deepsequencing，HITS)、轉(zhuǎn)座子定向插入位點(diǎn)測序等。

杭州沃森生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的Tn-seq建庫流程可兼容多種突變體庫構(gòu)建方法，只需明確轉(zhuǎn)座子序列信息即可構(gòu)建二代測序文庫進(jìn)行后續(xù)測序分析。

技術(shù)流程圖如下：
 

Tn-seq技術(shù)服務(wù)流程

數(shù)據(jù)分析流程

可視化結(jié)果

已發(fā)表文獻(xiàn)參考：

1. Jiawen Xiao, et al. Analysis of key genes for the survival of Pantoea agglomerans under nutritional stress. International Journal of Biological Macromolecules 253 (2023) 1270590.

2. Fan Yin, et al. Genome-wide identification of genes critical for in vivo fitness of multi-drug resistant porcine extraintestinal pathogenic Escherichia coli by transposon-directed insertion site sequencing using a mouse infection model. Virulence. 2023, VOL.14, NO.1, 2158708.

杭州沃森生物技術(shù)有限公司，依托分子生物學(xué)特別是NGS應(yīng)用方面的豐富經(jīng)驗(yàn)，為精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和科研提供高品質(zhì)產(chǎn)品和成本優(yōu)化解決方案。

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