激光共聚焦熒光芯片掃描儀助力能量代謝研究

 

• 研究目的：內(nèi)源性腎上腺皮質(zhì)肽刺鼠關(guān)聯(lián)蛋白（AgRP）在覓食行為研究十分廣泛，但其對能量代謝的調(diào)節(jié)尚不清楚。
• 作者單位：美國-斯克利普斯研究所
• 期刊：iScience
• 發(fā)表年份：2019年
• 樣本：合成的多肽
• 芯片類型：聚糖芯片
• 芯片掃描儀：Innopsys公司的激光共聚焦熒光芯片掃描儀

實驗方法：

第一步：進行AgRP相關(guān)的多肽合成和純化。

第二步：氨基(-NH2)修飾的的硫酸肝素聚糖化合物點印在NHS包被的玻片上，AgRP（WT）和兩種AgRP電荷變體肽（4Q；4K）在TMS緩沖液中稀釋至50 mg/mL，與玻片進行孵育，隨后加入絡(luò)合的Rb抗人AgRP 抗體(10 mg/mL，一抗)和抗Rb IgG-Alexa 488 (5 mg/mL，熒光二抗)，最后使用法國Innopsys公司的生物芯片掃描儀進行熒光信號檢測和定量分析。

結(jié)果顯示：AgRP和電荷修飾AgRP變體與硫酸肝素聚糖陣列相結(jié)合；AgRP的結(jié)合親和力與巰基化狀態(tài)和硫酸肝素寡糖的長度有關(guān)，6S和NS磺化對AgRP的結(jié)合有利，而3S磺化對AgRP的結(jié)合不利，AgRP-4K突變型的結(jié)合能力是野生型的50倍，如下圖。 第三步：自由攝食量與對食物的操作性反應(yīng)監(jiān)測。

結(jié)果顯示：AgRP-4K突變型小鼠對食物的攝取量和體重都有明顯增加，如下圖（A、E每日基本進食量；B、F未突變野生型；C、G、D、H突變型）。 第四步：實驗動物綜合監(jiān)測，（氣體濃度--氧氣、二氧化碳測量、血流，體溫，活動，進食，飲水等），結(jié)果如下圖。 結(jié)論：

• 1.AgRP可增加小鼠的自由攝食和對食物的操作性反應(yīng)，降低氧氣消耗，降低體溫及活動，本體能量消耗較低。
• 2.AgRP可增加呼吸交換率，減少脂肪氧化和碳水化合物轉(zhuǎn)移
• 3.AgRP作用的持續(xù)時間和強度取決于其帶正電的氨基酸密度，表明代謝作用取決于其對硫酸肝素的親和力。

綜上：通過驗證AgRP與硫酸肝素之間的相互作用，表明其參與到中樞能量調(diào)節(jié)和脂肪代謝過程當中，這對臨床研究代謝性疾病具有重要意義。 原文：Chen et al.iScience 22, 557– 570 December 20, 2019 . https://doi.org/10.1016/ j.isci.2019.10.061 Innopsys 成立于1999年�？偛课挥诜▏�，一直致力于生物醫(yī)學領(lǐng)域相關(guān)儀器和軟件的自主研發(fā)和生產(chǎn)。Innoscan系列掃描儀，采用先進的共聚焦PMT檢測器和多激光掃描光路，可以同時進行多通道熒光檢測。不僅有效降低了熒光光漂白現(xiàn)象以及信號損失，還可以有效縮短掃描時間。在基因組和蛋白組表達，基因突變，SNP檢測，CGH，細菌病毒檢測，腫瘤特異性標志篩查，病理組織篩查等方面都有非常廣泛的應(yīng)用。 

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