脫鹽換液首選填料：Bestdex G-25系列葡聚糖凝膠的介紹及應用案例
說到分子篩，大家肯定都不陌生。分子篩又叫做凝膠過濾層析、空間排阻色譜等，是應用蛋白質分子量或分子形狀的差異去進行分離的一項蛋白純化技術。通俗地說，該技術就是像篩子一樣，將分子依據(jù)“高矮胖瘦”進行分離。
這項技術使用的填料，是一類多孔性天然來源的聚合物材料。在層析過程中，直徑大于凝膠網(wǎng)孔的生物分子，只能沿凝膠顆粒間的空隙隨溶劑流動，流程短，移動速度快，首先被洗脫；中等大小的分子，可以在凝膠顆粒內外分布，部分進入顆粒，因此在大分子物質和小分子物質之間被洗脫；直徑小于凝膠凝膠網(wǎng)孔的生物分子，可以自由進出網(wǎng)孔，移動速率慢而最后被洗脫。
Fig. 1 凝膠層析原理圖
凝膠過濾主要應用于兩類分離領域：
• 組分分離（脫鹽/換液）：上樣量可達柱體積的30%。
• 精細分離（分離不同大小分子量的生物分子）：上樣體積為0.5%~4%，柱床高度通常高于60cm。
博格隆Bestdex G-25系列產品是以葡聚糖為基架材料制成的凝膠過濾介質，具有親水、多孔的特性。
根據(jù)顆粒大小，博格隆Bestdex G-25系列推出了四種類型的產品：Bestdex G-25 C（Coarse，粗）、Bestdex G-25 M（Medium，中）、Bestdex G-25 F（Fine，細）、Bestdex G-25 SF（Superfine，超細）。
+顆粒大小呈正態(tài)分布，在該范圍內的顆粒占總數(shù)的80%以上
++不同溶液中顆粒大小會有差異，本數(shù)據(jù)為在PBS中顆粒大小
+++BXK26/70，柱高60cm，壓力0.3MPa測得
Fig. 2 博格隆Bestdex G-25系列
Bestdex G-25系列產品的主要特點
• 非吸附層析：靠分子量大小差異實現(xiàn)分離，無吸附與解吸附過程，樣品回收率高。
• 操作條件溫和：能夠在相當廣的溫度范圍內進行操作。
• 僅需一種緩沖液：全程僅需一種緩沖液即可完成實驗，操作簡單。
Bestdex G-25系列產品的應用領域
Bestdex G-25系列凝膠過濾介質通過分子篩效應，實現(xiàn)樣品的分離純化。常用于蛋白質、多糖、核酸等生物樣品的緩沖液置換、脫鹽和去除小分子物質，也可以用于多肽、寡核苷酸的分離純化，以及抗生素、化學合成藥物、天然產物的分離純化，還可用于化工中納米材料的提純以及環(huán)保領域的污水處理等領域。
實際應用案例——緩沖液置換
• 層析柱：EzFast 5mL G-25 F x 2
• 平衡液：0.2M NaHCO3、0.5M NaCl，pH8.3
• 上樣體積：1.9mL
Fig. 3 Bestdex G-25 凝膠層析圖譜
- 使用方法
由于介質是以干粉的方式提供的，所以需要先溶脹，然后裝填層析柱后使用。
- 緩沖液選擇
一般選用水相緩沖液，緩沖液的pH和電導對于分離的效果影響不大，主要考慮樣品在緩沖液中的穩(wěn)定性。
- 流速
以推薦的流速運行，柱高越大流速越慢。
- 樣品準備
為防止樣品堵塞柱子，在上樣前樣品需要用0.45μm的微孔濾膜過濾，若目的物和雜質差別比較小，上樣體積按照柱體積的1%~5%上樣；若目的物和要去除的雜質差別比較大（如去除樣品中的無機鹽或緩沖液交換），上樣體積按照柱體積的10%~25%上樣。
