T4 UvsX重組酶在RPA反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用

T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase是一種來源于T4噬菌體的重組酶，屬于RecA/Rad51叢的酶，它在RPA反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。T4 UvsX重組酶具有典型的ABC三結(jié)構(gòu)域，分別負(fù)責(zé)ATP結(jié)合，相互作用與DNA結(jié)合。它通過識(shí)別單鏈DNA上連續(xù)的6-8個(gè)核苷酸堿基，與DNA形成球狀多聚體結(jié)構(gòu)。

T4 UvsX Recombinase由E.coli表達(dá)的重組蛋白，是將蛋白基因接入穩(wěn)定表達(dá)載體，經(jīng)克隆篩選，質(zhì)量驗(yàn)證，挑選的穩(wěn)定表達(dá)株，由化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基（不含有任何動(dòng)物源成分）發(fā)酵制備，工藝穩(wěn)定，保證了產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。

規(guī)格參數(shù)：

貨號(hào)：EH03501 

規(guī)格：100ug/1mg/5mg/20mg     

為工業(yè)客戶提供g級(jí)。

質(zhì)量控制:

純      度: 經(jīng)高效液相色譜（SEC-HPLC）和SDS-PAGE檢測(cè)，純度大于95%.

使用說明：

長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-80℃，首次使用后保存于-20℃,避免反復(fù)凍融。

工作機(jī)理:

T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase在RPA反應(yīng)中的主要作用是:

(1)穩(wěn)定單鏈DNA

在常溫下，雙鏈DNA初變性為單鏈DNA后，T4 UvsX Recombinase立即識(shí)別并結(jié)合單鏈DNA，形成穩(wěn)定的蛋白-DNA復(fù)合體，防止單鏈DNA再次回環(huán)成雙鏈。

(2)引物退火

在T4 UvsX Recombinase的保護(hù)下，引物與單鏈DNA進(jìn)行退火，與之形成短的雙鏈DNA片段。 

(3)替換與釋放

當(dāng)聚合酶識(shí)別引物-模板雙鏈體并開始進(jìn)行延伸時(shí)，T4 UvsX Recombinase被替換并釋放，使單鏈DNA完全暴露，供聚合酶延伸。

(4)再循環(huán)

延伸產(chǎn)生的新合成DNA同樣暴露為單鏈，T4 UvsX Recombinase再次識(shí)別并結(jié)合，實(shí)現(xiàn)再循環(huán)，直至擴(kuò)增完成。

T4 UvsX重組酶優(yōu)點(diǎn):

• 可在常溫下高效穩(wěn)定單鏈DNA，這是RPA實(shí)現(xiàn)等溫?cái)U(kuò)增的關(guān)鍵。

• 與DNA的結(jié)合和釋放是反復(fù)可逆的，這使其在RPA反應(yīng)中的再循環(huán)利用成為可能。

• 易于保存和純化，更利于RPA技術(shù)的商業(yè)化開發(fā)。

• 目前已有成熟的生產(chǎn)工藝，降低了RPA成本，有利于其廣泛應(yīng)用。

T4 UvsX重組酶在RPA技術(shù)中主要應(yīng)用如下:

1. RPA反應(yīng)中的關(guān)鍵酶

T4 UvsX Recombinase在RPA反應(yīng)中用于穩(wěn)定和保護(hù)單鏈DNA，并在引物退火和聚合酶延伸過程中實(shí)現(xiàn)替換和再循環(huán)，這是RPA技術(shù)實(shí)現(xiàn)等溫?cái)U(kuò)增的關(guān)鍵。

2. 商業(yè)RPA試劑盒

許多商業(yè)RPA試劑盒中的重組酶成分主要由T4 UvsX Recombinase提供，如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。

3. POCT檢測(cè)試劑

RPA技術(shù)因其快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，非常適合POCT。而T4 UvsX Recombinase的應(yīng)用是實(shí)現(xiàn)RPA的POCT檢測(cè)試劑的關(guān)鍵。一些基于此的產(chǎn)品已用于臨床快速診斷，如Ebola病毒、Meningitis等的檢測(cè)。

4. 病原體核酸檢測(cè)

設(shè)計(jì)與特定病原體高度保守的基因片段同源的引物，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可實(shí)現(xiàn)病原體DNA/RNA的快速、高靈敏度檢測(cè),用于臨床病原體感染的診斷。

5. 基因檢測(cè)與分型

針對(duì)特定的基因突變或多態(tài)性位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可用于相關(guān)基因型的檢測(cè)與分型，應(yīng)用于遺傳病基因診斷等。

6. 體外核酸檢測(cè)

將與靶核酸同源的引物與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可實(shí)現(xiàn)體外各種DNA、RNA的高通量檢測(cè)，如miRNA、circRNA的檢測(cè)等，用于生物學(xué)基礎(chǔ)研究與臨床診斷。

7. 轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)

設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因片段，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因生物的快速檢測(cè)，用于食品安全等領(lǐng)域。

相關(guān)產(chǎn)品：

EH03501 T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase

EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein

EH03401 T4噬菌體基因32編碼蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein

EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment

H10124 dNTP Mix 10 mM 用于PCR擴(kuò)增 /dATP、dCTP、dGTP和dTTP的預(yù)混溶液

H30159 聚乙二醇 8000 PEG 8000 25322-68-3

HA11521 1,4-二硫代蘇糖醇（DTT） DL-Dithiothreitol 3483-12-3 ≥99.0% 100g/1kg

HA11724 磷酸肌酸二鈉鹽 Creatine phosphate disodium salt 922-32-7

EH04501 重組肌酸激酶(CK) Creatine Kinase

HA11725 5'-三磷酸腺苷二鈉(ATP-2Na)/Adenosine 5'-triphosphate disodium salt hydrate 34369-07-