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實(shí)時(shí)熒光定量PCR全面解決方案

實(shí)時(shí)熒光定量PCR全面解決方案


realtime fluores-cence quantitative PCR
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服務(wù)類(lèi)別:芯片與生物信息學(xué)總訪問(wèn):2236
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一、技術(shù)路線

樣品收集

樣品DNA提取
特異性引物設(shè)計(jì)、特異性探針設(shè)計(jì)
引物合成、探針合成
熒光定量PCR檢測(cè)
樣品質(zhì)量檢測(cè)
數(shù)據(jù)分析
樣品RNA提取
反轉(zhuǎn)錄

 二、技術(shù)方法

2.1 樣本基因組提取
2.1.1 RNA提取
*         所需樣本量:細(xì)胞(≥106)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,總RNA(≥20μl,濃度≥ 50ng/μl)。
*         樣本保存:組織樣本請(qǐng)保存在-80ºC或保存在Trizol中(液氮研磨后)或保存在RNAlater中(動(dòng)物組織)
*         樣品運(yùn)輸:用凍存管保存,并用干冰或液氮運(yùn)輸。
相關(guān)技術(shù)服務(wù)
服務(wù)項(xiàng)目
內(nèi)容說(shuō)明
RNA提取
 從血液、組織、葉片等樣本材料中提取總RNA
血清RNA提取
 從1-5ml血清中提取總RNA
石蠟包埋組織RNA提取
 從石蠟包埋的組織塊中提取總RNA
2.1.2 DNA提取
*         所需樣本量:細(xì)胞(≥106)、組織(≥300mg)、血液(≥2ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,總DNA(≥20μl,濃度≥ 50ng/μl);
*         樣本保存:組織樣本請(qǐng)保存在-80ºC;
*         樣品運(yùn)輸:用凍存管保存,并用干冰或液氮運(yùn)輸。
相關(guān)技術(shù)服務(wù)
服務(wù)項(xiàng)目
內(nèi)容說(shuō)明
DNA提取
 從血液、組織、葉片等樣本材料中提取總DNA
血清DNA提取
 從1-5ml血清中提取總DNA
石蠟包埋組織DNA提取
 從石蠟包埋的組織塊中提取總DNA
2.1.2樣本質(zhì)量檢測(cè)
如果客戶給的樣本是已提取好的總RNA樣本,需滿足以下條件:
*         完整性:1.2%瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)兩條帶(28s、18s RNA),其中28s RNA條帶的亮度是18s RNA條帶亮度的1.5~2.0倍,否則說(shuō)明RNA出現(xiàn)了降解。如果出現(xiàn)彌散片狀或者條帶缺失,則說(shuō)明RNA樣本出現(xiàn)嚴(yán)重降解,說(shuō)明樣本不可用;
*         純度:OD260/OD280在1.8~2.1之間,比值最好為2.0(保存液為pH=7.0 的RNase free ddH2O)。DNA 應(yīng)該去除干凈;
*         濃度:最低濃度不低于200ng/μl,每個(gè)樣品總量不少于10μg;
*         保存條件:要溶解在H20或TE (pH 8.0),用凍存管保存,并用干冰或液氮運(yùn)輸;。
注:建議在條件允許情況下,提供可供兩次樣品制備的量,以確保實(shí)驗(yàn)質(zhì)量及延續(xù)性。

 

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