蛋白指紋圖譜SELDI實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

北京伯奧克生物技術(shù)有限公司蛋白指紋圖譜SELDI實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

一、簡(jiǎn)介：
北京伯奧克生物技術(shù)有限公司擁有較為成熟的SELDI-TOF-MS技術(shù)，用于快速而有效地對(duì)蛋白樣品進(jìn)行分離、處理、數(shù)據(jù)分析和鑒定；建立蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)、發(fā)現(xiàn)疾病的相關(guān)蛋白和具有重要應(yīng)用前景的生物標(biāo)記分子、建立疾病的早期診斷和治療監(jiān)測(cè)方法。中心擁有的大規(guī)模基因組學(xué)測(cè)序與研究平臺(tái)和生物信息學(xué)技術(shù)平臺(tái)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要保證。我們依靠中心實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有的儀器，為廣大科研工作者提供先進(jìn)的服務(wù)——蛋白質(zhì)樣品SELDI-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)處理分析。

二、設(shè)備儀器：
Ciphergen® SELDI-TOF-MS (Surface Enhanced Laser Desorption Ionization, time-of fight mass spectrometry)表面加強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(蛋白質(zhì)指紋圖譜儀)
ProteinChip SELDI系統(tǒng)用于從大量復(fù)雜生物學(xué)樣品中快速獲得蛋白質(zhì)分子量圖譜，發(fā)現(xiàn)Biomarker。它使用表面增強(qiáng)的激光解吸離子（Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization）技術(shù)來(lái)捕獲、檢測(cè)和測(cè)量復(fù)雜生物樣品中的肽段和蛋白質(zhì)的分子量。
Bruker Daltonics  solarix® FTMS
solarix—— 新一代雜聯(lián)Qq-FTMS系統(tǒng)，體現(xiàn)了質(zhì)譜能力與擴(kuò)展性能核心技術(shù)提高的頂峰。這些技術(shù)提高包括：超高的靈敏度 、無(wú)可匹敵的質(zhì)量準(zhǔn)確度和寬譜分辨率 、寬范圍結(jié)構(gòu)解析工具包括電子轉(zhuǎn)移解析(ETD) 、擴(kuò)拓的質(zhì)量范圍 、選擇性離子富集和強(qiáng)化的動(dòng)態(tài)范圍 、針對(duì)應(yīng)用的優(yōu)化解決方案包。solarix 系列代表了最新的FTMS，是目前市場(chǎng)上最靈敏、最準(zhǔn)確、最高分辨力和最寬動(dòng)態(tài)范圍的儀器。 solarix 家族也擁有無(wú)與倫比的兼容性和超出其他所有儀器的客戶(hù)定制能力，可與ETD等多種配件結(jié)合使用。

三、測(cè)試范圍：
針對(duì)血清、血漿、體液、組織、真菌、細(xì)菌、細(xì)胞培養(yǎng)物以及植物等樣本的差異蛋白質(zhì)組研究，以蛋白質(zhì)芯片為載體，通過(guò)對(duì)目標(biāo)疾病樣本組及對(duì)照組之間進(jìn)行鑒定，以期找到能夠區(qū)分不同組別的差異峰，并通過(guò)對(duì)差異峰進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定，期望找到與目標(biāo)疾病密切關(guān)聯(lián)的基因/蛋白

四、蛋白質(zhì)芯片操作流程圖
SELDI蛋白質(zhì)芯片的使用包括四個(gè)步驟：
步驟一：芯片類(lèi)型的選擇
蛋白質(zhì)芯片提供了多種色譜的功能，包括親水、疏水、陽(yáng)離子交換、陰離子交換以及金屬親和表面等。此外，通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)選定的蛋白質(zhì)或者其他目標(biāo)分子，可以對(duì)芯片表面實(shí)現(xiàn)預(yù)活化，從而設(shè)計(jì)出具有更高針對(duì)性、特異性的芯片。
步驟二：上樣
血清、細(xì)胞或者組織的裂解液、尿、腦脊液，或者其他蛋白質(zhì)勻漿液等復(fù)雜的生物學(xué)樣品——包括那些含有高濃度鹽離子和去垢劑的樣品——都可以直接上樣于蛋白質(zhì)芯片表面。樣品通過(guò)手工加樣或者自動(dòng)上樣儀進(jìn)行點(diǎn)樣。復(fù)雜蛋白質(zhì)樣品中的一個(gè)特定亞群將通過(guò)簡(jiǎn)單的化學(xué)作用或者蛋白質(zhì)相互作用被芯片捕獲。
步驟三：未結(jié)合成分的洗脫
孵育后，未結(jié)合的蛋白和其他成分從芯片表面洗脫掉。只有那些特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)才保留下來(lái)用于進(jìn)一步的分析。這種選擇性的洗脫進(jìn)一步選取基于芯片特色的蛋白質(zhì)集合。
步驟四：在SELDI蛋白質(zhì)閱讀機(jī)上進(jìn)行分析
在洗脫步驟之后，點(diǎn)加上含有能量吸收分子（EAM）的有機(jī)溶液。EAMs對(duì)樣品的離子化起關(guān)鍵作用。在蛋白質(zhì)溶解到含有EAM的溶液之后，溶液揮發(fā)掉，在芯片表面形成蛋白質(zhì)和EAMs的共結(jié)晶。
芯片在SELDI閱讀機(jī)上進(jìn)行分析，后者是一種時(shí)間飛行質(zhì)譜。芯片閱讀機(jī)內(nèi)有一個(gè)氮源的激光器，導(dǎo)致離子化和解吸附過(guò)程的產(chǎn)生。激光能量誘導(dǎo)蛋白質(zhì)離子化以及從晶體態(tài)到氣態(tài)的轉(zhuǎn)變。
一旦進(jìn)入到氣態(tài)，帶電蛋白質(zhì)分子在一個(gè)分離電壓作用下迅速地運(yùn)動(dòng)，或稱(chēng)“飛行”。分離電壓對(duì)樣品中所有的分子具有相同的作用，使之表現(xiàn)出基于分子量差別的不同飛行時(shí)間。SELDI閱讀機(jī)記錄下這些飛行時(shí)間，換算成分子量。

五、送樣須知：
1、樣品來(lái)源：以血清為例，采集臨床病人及正常人血清，并做好臨床資料的收集。采樣數(shù)量每組30例以上（統(tǒng)計(jì)要求），一般情況下病人樣品與正常人樣本相等，也可以病人樣品略多于正常人。其他標(biāo)本（如組織細(xì)胞裂解液）請(qǐng)自行蛋白濃度測(cè)定后送檢。
 2、寄送要求：蛋白質(zhì)條帶和干粉冰袋包裝寄送，蛋白質(zhì)溶液干冰或液氮包裝寄送，請(qǐng)告知運(yùn)單號(hào)我們會(huì)安排專(zhuān)人接收。北京本地客戶(hù)可上門(mén)收樣。
注：樣本應(yīng)避免各類(lèi)污染和反復(fù)凍融。

六、檢測(cè)報(bào)告：
從收到樣品起5個(gè)工作日內(nèi)可給出樣品的檢測(cè)報(bào)告，以電子郵件的形式發(fā)給您并附帶檢測(cè)結(jié)果分析。包括結(jié)果有：質(zhì)譜圖原始數(shù)據(jù)、肽段分子量、數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果； 基于SPSS和BPS分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)得出的原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分析項(xiàng)目包括原始數(shù)據(jù)的分布情況分析、差異峰的篩選、聚類(lèi)分析、主成分分析（PCA）、疾病預(yù)測(cè)模型的構(gòu)建及差異峰所對(duì)應(yīng)的蛋白的生物信息學(xué)鑒定六個(gè)項(xiàng)目，以充分挖掘原始數(shù)據(jù)中有價(jià)值的信息

七、實(shí)驗(yàn)周期及收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
 項(xiàng)目 單價(jià) 周期
1 SELDI蛋白質(zhì)芯片表達(dá)譜 300元/例 5個(gè)工作日
2 Qq-FTMS蛋白鑒定 15000元/個(gè) 90個(gè)工作日
 
八、質(zhì)量承諾：提供客觀的蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，鑒定不成功不收取任何費(fèi)用。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后所有實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)均由客戶(hù)帶回，所有相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸客戶(hù)所有。 
 
九、成功案例
蛋白芯片技術(shù)篩選肝癌血清標(biāo)志蛋白的初步研究 鄭燕華  李寧  張建中 《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》 2005年06期
SELDI-TOF-MS在腫瘤性膽囊息肉樣病變?cè)\斷中的作用 作者:李永哲,胡朝軍,李寧, <<中華外科雜志>>2008年 第46卷 第7期
血清蛋白質(zhì)指紋圖譜模型在腎癌診斷中的應(yīng)用 鄧碧萍.李寧.王彭 [期刊論文] -中華泌尿外科雜志2006(8)
應(yīng)用SELDI質(zhì)譜技術(shù)篩選胰腺癌患者的血清標(biāo)志蛋白A screening for specific biomarkers in serum of pancreatic cancer patients by SELDI technology 作者:胡朝軍,李寧,劉永鋒,《中國(guó)普通外科雜志》CHINESE JOURNAL OF GENERAL SURGERY 2008年 第03期
血液蛋白質(zhì)組與質(zhì)譜儀檢測(cè)流程標(biāo)準(zhǔn)化初探 劉建棟 李永哲 李寧 《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床》  ISTIC SCI PKU 2007 27(2)  R341 R446-33 
電離-飛行時(shí)間-質(zhì)譜技術(shù)分析免疫大鼠血清和腦脊液的變化 李寧 李永哲 高揚(yáng)《中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志》2008年第1期
癌胚抗原陰性的結(jié)直腸癌檢測(cè)和結(jié)直腸癌預(yù)后相關(guān)生物標(biāo)記 屠世良.酈衛(wèi)星.李寧. 《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床》2007(08)
應(yīng)用蛋白指紋圖譜技術(shù)篩選原發(fā)性膽汁性肝硬化患者血清特異性標(biāo)志物  胡朝軍 李永哲  李寧 《世界華人消化雜志》2008年1月28日第16卷第3期
應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)脂肪肝患者血清標(biāo)志物的篩選  顏懷軍 陳兆軍 李寧 《世界華人消化雜志》 2008年12月8日;16(34): 3904-3909
蛋白芯片聯(lián)合SELDI-TOF-MS在卵巢癌診斷中的應(yīng)用  顧蓓 李艷 李紅霞 《山東醫(yī)藥》 2009 49(18) 
痰瘀互結(jié)證冠心病模型的病理機(jī)制及方證相應(yīng)基礎(chǔ)研究 李欣志 《中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院》  CNKI:CDMD:1.2008.200957
Serum methylated proteins as a novel method to differentiate hepatocellular carcinoma from hepatitis B induced chronic liver disease.Licheng Dai, Shangxian Gao, Jiandong Liu, Chuanding Yu, Ning Li, Peng Wang, Chunhai Li, Proc Amer Assoc Cancer Res, Volume 47, 2006
Serum protein fingerprint of patients with pancreatic cancer by SELDI technology.Ning Ma, Chun-lin Ge , Feng-ming Luan, Dian-bo Yao ,Chao-jun Hu   Ning Li   and Yong-feng Liu  Chinese Journal of Cancer Research  Volume 20, Number 3 / 2008
Screening of serum biomarkers in hepatocellular carcinoma by SELDI technique:a preliminary study.ZHENG Yan-hua, ZOU De-wei, FENG Kai, CUI Yan, ZHANG Ming, LI Ning, XU Yang, ZHANG Jian-zhong, Chinese Journal of Laboratory Medicine;2005-06
Serum proteomic fingerprintings as a novel reference pattern to distinguish cancer from non-cancer in early stage and monitor cancer prognosis: A multi center three-year study in China. Shangxian Gao, Xiaohang Zhao, Ning Li and Zhenhua Yang ,Proc Amer Assoc Cancer Res, Volume 46, 2005
MALDI-TOF MS combined with magnetic beads for detecting serum protein biomarkers and establishment of boosting decision tree model for diagnosis of systemic lupus erythematosus Zhuochun Huang, Yunying Shi, Bei Cai, Lanlan Wang, Yongkang Wu, Binwu Ying, Ning Li , Chaojun Hu and Yongzhe Li Rheumatology 2009;48:626-631
Promising Diagnostic Biomarkers for Primary Biliary Cirrhosis Identified With Magnetic Beads and MALDI-TOF-MS YONG-ZHE LI, CHAO-JUN HU, XIAO-MEI LENG,GUAN-FEI ZHAO, NING LI,  THE ANATOMICAL RECORD 292:455-460(2009)
Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry Combined with Magnetic Beads for Detecting Serum Protien Biomarkers in Parkinson’s Disease Yao-Hua Li ,Jian Wang ,Xiao-Li Zheng, Yan-Li, Shun Yu ,Xin He,Piu Chan  European Neurology Eur Neurol 2011;65:105-111
Serum proteomic profiling analysis of chronic arsenic exposure by using SELDI-TOF-MS technology.Lijun Zhao,Yanhui Gao,Yanmei Yang,Yudan Wei,Yuanyuan Li,Hongqi Feng,Wei Wei,Yunpeng Ding,Dianjun Sun  Toxicology Letters 195 (2010) 155–160
Identification of serum biomarkers for lung cancer using magnetic bead-based SELDI-TOF-MS. Qi-bin SONG,Wei-guo HU,Peng WANG,Yi YAO Hua-zeng ZENG  Acta Pharmacologica Sinica 2011:1-6
Proteomic profiling in the sera of workers occupationally exposed to arsenic and lead: identification of potential biomarkers  Rihong Zhai, Suhua Su, Xin Lu, Ruiqing Liao, Xianmin Ge, Min He, Yuanjiao Huang, Sui Mai, Xi Lu & David Christiani,  BioMetals (2005) 18:603–613
Application of serum protein fingerprint in diagnosis of papillary thyroid carcinoma Jia-XiangWang, Jie-kai Yu, Li Wang, Qiu-Liang Liu, Jiao Zhang and Shu Zheng  Proteomics 2006, 6, 5344–5349
Diagnosis of gastric cancer using decision tree classification of mass spectral data  Yahui Su, Jing Shen, Honggang Qian, Huachong Ma, Cancer Sci | January 2007 | vol. 98 | no. 1 | 37–43
Prediction of chronic hepatitis B, liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma by SELDI-based serum decision tree classiWcation  Jiefeng Cui • Xiaonan Kang • Zhi Dai • Cheng Huang • Haijun Zhou • Kun Guo •Yan Li • Yu Zhang • Ruixia Sun • Jie Chen • Yang Li • Zhaoyou Tang •Toshimasa Uemura • Yinkun Liu  J Cancer Res Clin Oncol (2007) 133:825–834
Toward the Proteomic Identification of Biomarkers for the Prediction of HBV Related Hepatocellular Carcinoma Qing-Yu He, Rui Zhu, Ting Lei,,Mandy Y.M. Ng,John M. Luk, Pak Sham, George K.K. Lau,and Jen-Fu Chiu   Journal of Cellular Biochemistry 103:740–752 (2008)
An approach to the characterization of serum low-molecular weight proteins/peptides in liver injury using SELDI–TOF MS and factor analysis Xiaoli Liu a, Lanjuan Li a,Guoyi Zhang b, Guoping Sheng a, Wei Xu   Clinical Biochemistry 40 (2007) 1266–1271
Serum diagnosis of diffuse large B-cell lymphomas and further identification of response to therapy using SELDI-TOF-MS and tree analysis patterning Xing Zhang, Bo Wang, Xiao-shi Zhang Zhi-ming Li, Zhongzhen Guan and Wen-qi Jiang   BMC Cancer 2007, 7:235

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