血清標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)研究

產(chǎn)品性能

基于蛋白質(zhì)芯片的血清標(biāo)志物的篩選是獲得生物標(biāo)志物的第一步，后續(xù)仍需要嚴格的驗證。就這一部分而言，分為三個部分：
1. 樣品選擇
樣本的選擇和質(zhì)量極其重要�？紤]到疾病的復(fù)雜性和個體差異性，需要準確記錄每個樣本的各個參數(shù)，以獲得準確的和可靠的結(jié)論。
樣本選擇要求：
a. 有明確的臨床診斷結(jié)論；
b. 血清收集時最好未進行治療(除特別研究外）。

樣本信息登記表（根據(jù)不同疾病額外需更多參數(shù)）：

備注：健康人隨機選擇但保證年齡分布和性別分布應(yīng)與病人組一致。
取樣步驟和要求：
a. 需用促凝采血管，采血量為6-10ml，收集血清3-5ml;
b. 血樣需離心，離心轉(zhuǎn)速為3000rpm，4℃，5分鐘；
c. 所有血清標(biāo)本用標(biāo)準凍存管保存，1 ml/管，每例病人血清保存3-5管；所有標(biāo)本于-20℃環(huán)境保存時間不大于7天， -86℃可長期保存。

2. 芯片篩選
按照本公司標(biāo)準SOP執(zhí)行，簡述為：
a. 芯片封閉——使用BSA封閉芯片上為結(jié)合蛋白的位點。
b. 血清樣品孵育——血清按照一定的比例稀釋，在存在封閉劑的條件下加入到芯片表面，該步驟使得血清中存在的抗體同其特異性識別的抗原結(jié)合；
c. 清洗——去除未結(jié)合的蛋白和抗體；
d. 熒光檢測——使用熒光標(biāo)記的anti-Human-IgG或IgM或IgD的二抗針對性檢測結(jié)合的抗體，清洗后置于熒光掃描儀下顯示結(jié)果。

3. 數(shù)據(jù)分析
由本公司專業(yè)數(shù)據(jù)分析團隊完成，具體方法簡述為：
a. 依據(jù)芯片蛋白樣品標(biāo)記文件（Gel file）提取所有血清樣本對應(yīng)芯片上的所有蛋白點的熒光信號數(shù)據(jù)；
b. 使用基于背景的算法對芯片（樣品）間的數(shù)據(jù)進行歸一化處理;
基于數(shù)學(xué)檢驗統(tǒng)計分析，找出在開放性肺結(jié)核、非開放性肺結(jié)核特異性蛋白，并計算其與健康人和其它對照組的P值。
d. 畫出聚簇分析圖和box-plot圖，生成潛在血清標(biāo)志物名單。

產(chǎn)品應(yīng)用

 結(jié)核桿菌蛋白質(zhì)組芯片及其分泌蛋白芯片，可用于發(fā)現(xiàn)結(jié)核病或結(jié)核感染相關(guān)的疾病標(biāo)志物，如開放性肺結(jié)核、肺外結(jié)核、HIV共感染等。

 人蛋白質(zhì)組芯片，可用于發(fā)現(xiàn)腫瘤、自身免疫疾病等的疾病標(biāo)志物。

 以上獲得的潛在標(biāo)志物均需要更多樣品和更嚴格的驗證。