小鼠灌胃
小鼠灌胃方法比較簡單,需要關(guān)注的只有兩點:
一是要保持小鼠的頭部和頸部成一直線,方便灌胃針頭進入;
二是動作要輕柔,從口角進入,防止損失食道。做的多了自然就熟練了。
具體操作過程如下:
1. 準備灌胃針頭。一般可以從市場上面買到,實在沒有的話,可以用12號的針頭,剪去針尖,用砂紙將頭端磨平,也可以用。但是買的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口,自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉,用這樣的針頭灌胃,損失小鼠食道的可能性比較大。
2.抓住小鼠,使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動作很簡單,左手的小指和無名指抓住小鼠的尾巴,另外三個手指抓住小鼠的頸部即可。因為小鼠始終在活動中,若一次抓的感覺不是很順手,要放開重新抓,不要逞強進行下一步操作。
3. 抓好小鼠就可以灌胃了,一般用1ml的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進入,壓住舌頭,抵住上顎,輕輕向內(nèi)推進,進入食管后會有一個刺空感,進入食道后就可以推注藥液了。(我認為,所謂的灌胃,不必要灌胃針頭進入小鼠的胃部,進入食管后就可以推藥了,這樣對小鼠食道的損傷要小點,特別是要長期灌胃給藥的情況下。)當(dāng)然,灌胃針頭也可以再往里面深入一點,防止藥液從口中流出。
4. 灌胃容積一般是0.1~0.2ml/10g,最大0.35ml/10g,每只小鼠的灌胃最大容積不超過0.8ml。
小鼠腹腔注射
腹腔注射是常見的給藥方式,尤其是在麻醉時。常見的麻醉方法均是麻醉藥物腹腔注射。
1. 小鼠腹腔注射可以用1ml的注射器,配合4號針頭。
2. 腹腔注射時右手持注射器,左手的小指和無名指抓住小鼠的尾巴,另外三個手指抓住小鼠的頸部,使小鼠的頭部向下。這樣腹腔中的器官就會自然倒向胸部,防止注射器刺入時損傷大腸、小腸等器官。進針的動作要輕柔,防止刺傷腹部器官。
3. 尤其是對于體重較小的小鼠,腹腔注射時針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離,最好是從腹部一側(cè)進針,穿過腹中線后在腹部的另一側(cè)進入腹腔,注射完藥物后,緩緩拔出針頭,并輕微旋轉(zhuǎn)針頭,防止漏液。
4. 小鼠腹腔注射的給藥容積一般為5~10ml/kg。
小鼠靜脈注射
這也是常見的操作,稍微有點難度,沒有指導(dǎo)的話,一開始可能會感覺有點手足無措。但是可以肯定的說,只要掌握了方法,小鼠的尾靜脈注射還是很容易的。
操作步驟:
1. 首先要固定小鼠,最簡單的固定方法就是把小鼠放在盒子里面,讓它的尾巴伸在盒蓋的外面,用手抓住小鼠尾巴,輕輕往外拽,就可以固定好小鼠了。這種固定方法,小鼠可以在盒子里面活動,固定的也不是很牢固,但是只要你尾靜脈注射的手法很熟練,就足以用來注射了。
還有的固定方法就是用一個小的圓筒,最好是金屬做的,(可以在當(dāng)?shù)氐蔫F匠鋪,或者買白鐵鋪里面定做)首先是金屬比較結(jié)實,而且可以用來固定在鐵架臺上,方便操作。圓筒的一段有個蓋子可以拿下來,蓋子中間有個小孔,可以讓小鼠的尾巴伸出來(中間的小孔可以用膠布纏一下,防止銳利的邊緣割傷小鼠尾巴)。另外一段可以用金屬網(wǎng)的結(jié)構(gòu),網(wǎng)的形狀可以做成子彈頭的頭端形狀。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可以讓光線透近來,方便小鼠鉆進圓筒里面。圓筒的長度約10cm,直徑約 3~4cm,可以做個系列長度和直徑的圓筒,適合不同大小的小鼠。
2. 固定好小鼠后就是注射了,一般用一次性的1ml的注射器就可以了,玻璃 的1ml的注射器也可以用,針頭用4號的就可以了。
3. 注射前首先要讓小鼠的血管充盈?梢圆捎75%的酒精棉球擦拭的方法或者采用溫水浸泡的方法。若小鼠的血管很不清楚,推薦采用溫水浸泡的方法,水溫以不燙手為宜。溫水浸泡2~3分鐘后,取出小鼠尾巴,用干棉球擦拭。等一會兒,待血管充盈后,酒精棉球擦拭后就可以進針了。若血管還不充盈,可以反復(fù)用溫水浸泡,切不可冒險注射,除非你手法很熟練,另當(dāng)別論。
4. 小鼠尾部共有四條血管,一般認為左右的兩條靜脈比較容易注射,多采用這兩條靜脈進針。一般要求進針部位靠近小鼠的尾端,這樣若注射失敗的話,還可以再向上選擇進針點。但是進針部位也不可以太靠下,因為越往下,靜脈越細,操作越難,一般以小鼠尾巴下三分之一的位置比較好。
5. 最關(guān)鍵的就是進針了。進針時操作者左手食指和拇指固定住小鼠的尾巴,讓小鼠的尾巴在經(jīng)過拇指后向下彎曲,進針點靠近拇指指甲。針頭和血管呈約30°角,針尖斜面朝上,輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行,一般情況下一次就可以進入血管,可以將針頭刺入血管一大半,左右輕輕晃動針頭,確定針頭在血管內(nèi),就可以推注藥液了,正常情況下,推注的過程應(yīng)該沒有明顯阻力,血管也不會鼓起。推液時動作宜輕柔,若發(fā)現(xiàn)血管鼓起,那是針頭沒有刺入血管,需立即拔出針頭。
皮下注射給藥
將藥液推入皮下結(jié)締組織,經(jīng)毛細血管、淋巴管吸收進入血液循環(huán)的過程。作皮下注射常選項背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。操作時,常規(guī)消毒注射部位皮膚,然后將皮膚提起,注射針頭取一鈍角角度刺入皮下,把針頭輕輕向左右擺動,易擺動則表示已刺入皮下,再輕輕抽吸,如無回血,可緩慢地將藥物注入皮下。拔針時左手拇、食指捏住進針部位片刻,以防止藥物外漏。注射量約為0.1~0.3ml/10g體重。
皮內(nèi)注射給藥
將藥液注入皮膚的表皮河真皮之間,觀察皮膚血管的通透性變化或皮內(nèi)反應(yīng),接種、過敏實驗等一般作皮內(nèi)注射。先將注射部位的被毛剪掉,局部常規(guī)消毒,左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊,在兩指之間,用結(jié)核菌素注射器連接4.5針頭穿刺,針頭進入皮膚淺層,再向上挑起并梢刺入,將藥液注入皮內(nèi)。注射后皮膚出現(xiàn)一白色小皮丘,而皮膚上的毛孔極為明顯。注射量為0.1ml/次。
肌肉注射給藥
小鼠體積小,肌肉少,很少采用肌肉注射。當(dāng)給小鼠注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時,采用肌肉注射。操作時1人固定小鼠,另一人用左手抓住小鼠的1條后肢,右手拿注射器。將注射器與半腱肌呈90°角迅速插入1/4,注入藥液,用藥量不超0.1ml/10g體重。
靜脈注射給藥
將小鼠放在金屬籠或鼠夾中,通過金屬籠或鼠夾的孔拉出尾巴,用左手抓住小鼠尾巴中部。小鼠的尾部有2條動脈和3條靜脈,2條動脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面,3條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩惻的靜脈.拔去沿尾部靜脈走向的毛,置尾巴于45~50℃溫水中浸泡幾分鐘或用75%酒精棉球反復(fù)擦拭尾部,以達到消毒和使尾部血管擴張及軟化表皮角質(zhì)的目的。行尾部靜脈注射時,以左手拇指和食指捏住鼠尾兩惻,使靜脈更為充盈,用中指從下面托起尾巴,以無名指夾住尾巴的末梢,右手持4號針頭注射器,使針頭與靜脈平行(小于30°角),從尾巴的下1/4處進針,開始注入藥物時應(yīng)緩慢,仔細觀察,如果無阻力,無白色皮丘出現(xiàn),說明已刺入血管,可正式注入藥物。有的實驗需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥,注射部位應(yīng)盡可能從尾端開始,按次序向尾根部移動,更換血管位置注射給藥。注射量為0.05~0.1ml/10g體重。拔出針頭后,用拇指按住注射部位輕壓1~2min,防止出血。
小鼠采血
1.剪尾采血
手拇指和食指從背部抓住小鼠頸部皮膚,將小鼠頭朝下,小鼠保定后將其尾巴置于50°熱水中浸泡數(shù)分鐘,使尾部血管充盈。擦干尾部,再用剪刀或刀片剪去尾尖1~2mm,用試管接流出的血液,同時自尾根部向尾尖按摩。取血后用棉球壓迫止血并用6%液體火棉膠涂在傷口處止血。每次采血量0.1ml。
2.摘除眼球采血
左手抓住小鼠頸部皮膚,輕壓在實驗臺上,取側(cè)臥位,左手食指盡量將小鼠眼周皮膚往頸后壓,使眼球突出。用眼科彎鑷迅速夾去眼球,將鼠倒立,用器皿接住流出的血液。采血完畢立即用紗布壓迫止血。每次采血量0.6~0.1ml。
3.心臟采血
小鼠仰臥位固定,剪去胸前區(qū)被毛,皮膚消毒后,用左手食指在左側(cè)第3~4肋間觸摸到心搏處,右手持帶有4~5號針頭的注射器,選擇心搏最強處穿刺,當(dāng)刺中心臟時,血液會自動進入注射器。每次采血量0.5~0.6ml。
4.?dāng)囝^采血
動物醫(yī)學(xué)論壇右手用剪刀剪斷小鼠頸部約1/2~4/5,讓血液流入試管。此法可采血0.8~1.2ml。