用近重直（小傾角10º）轉(zhuǎn)頭快速分離RNA

 

設(shè)備：

Hitachi CP 100 MX或Beckman L—100xp 超速離心機(jī)日立P90NT 或Beckman NT 90 轉(zhuǎn)頭，8×5ml ，密封管。

 

溶液：

A液：0.5％ SDS，20mM Sodium acetate

10mM EDTA  (PH5.5)

B液：0.5％ Sodium N—lauroyl sarcosinate  (N—月桂肌氨酸鈉)

            20mM Sodium acetate ,10mM EDTA (PH5.5)

C液：5.7M CsCl，0.1M EDTA (PH5.5)

 

離心順序：

1．培養(yǎng)好的E.coli 600液，高速離心，50ml PP或PA管，9200 rpm×20分，4 ℃

2．每管沉淀加1ml A液，再加1ml phenol混勻，60℃，振蕩器上搖5分鐘

3．混勻后注入7ml PP或PA 離心管，每管試劑容量5—5.5 ml （日立R22A高速轉(zhuǎn)頭，18×7ml ，CR22G或CR21G或其他老型號(hào)離心機(jī)），9400 rpm , 4℃離心5分鐘。

4．每管取出800ul 上清液加入2.5倍乙醇，再加入1.2 ml 溶液B，最終溶積為4 ml。

5．超速離心管（5PA密封管），每管先加2 ml 混合液，然后用注射器深入離心管底部，每管加入約3 ml 溶液C直到加滿。

6．用日立STF2自動(dòng)熔封管器封口后，放入P90NT 轉(zhuǎn)頭85,000rpm ，15℃，離心2小時(shí)，加速“5”，減速“7”

注：不可超過8.5萬rpm，否則可能引起CsCl結(jié)晶。

7．離心后RNA沉淀在離心管底部，DNA在中下部溶液中。