分離純化方法選擇指南：等密度梯度離心法

圖 1 等密度區(qū)帶離心

因此，在離心前，樣品可置于梯度液的任意位置，一般是均勻分布在梯度液中。等密度區(qū)帶離心法的離心效果取決于樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越顯著，與樣品顆粒的大小與形狀無關(guān)。

速率區(qū)帶離心和等密度區(qū)帶離心都需預(yù)準(zhǔn)備梯度液。速率區(qū)帶離心的梯度液密度必須小于待分離組分中小顆粒的浮力密度。利用顆粒形狀和大小差異而形成的沉降速率不同達(dá)到分離目的。等密度區(qū)帶離心是一種平衡離心方法，利用顆粒密度差進(jìn)行分離，與顆粒形狀和大小無關(guān)，處理量比差速離心法大。

等密度梯度離心經(jīng)常使用的梯度液包括氯化銫(CsCI)、溴化鈉等，典型的應(yīng)用包括質(zhì)粒DNA（或者其他DNA、RNA核酸片段）的大規(guī)模高純度純化，脂蛋白的分離純化等。

質(zhì)粒DNA的氯化銫等密度梯度離心分離純化流程如下：



脂蛋白溴化鈉等密度梯度離心分離純化流程如下：

1、
人全血1000g離心10分鐘去除各種血細(xì)胞，上清為血清。

2、
血清加入NaBr密度梯度液（不連續(xù)梯度）的底部，往上依次鋪濃度變小的梯度液。

3、
然后在水平轉(zhuǎn)頭中，260,000g離心力14℃下離心24小時，各種密度的脂蛋白從管底浮向它們自己的等密度區(qū)形成了純的各種密度脂蛋白區(qū)。而離心管底部保留著各種血清蛋白。

4、
用上排法從離心管中抽出各層液體，經(jīng)DU核酸蛋白分析儀測定，定位各種不同密度血清脂蛋白。