法測(cè)效靶細(xì)胞殺傷——用流式細(xì)胞術(shù)

做免疫學(xué)特別是腫瘤學(xué)實(shí)驗(yàn)，總免不了要測(cè)淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷，國(guó)外最常用的是Cr51放射實(shí)驗(yàn)，但這個(gè)方法在國(guó)內(nèi)的不少地方都不能做，而MTT這個(gè)方法又太老，而且也不準(zhǔn)確，那么替代方法就用流式細(xì)胞術(shù)，又方便，又準(zhǔn)確。

 

具體參照如下：
1、計(jì)數(shù)靶細(xì)胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達(dá)到2uM,37度30分鐘。
2、拿出后，1000rpm,5min,可隱約看到細(xì)胞染成黃色，PBS洗三次
3、與效應(yīng)細(xì)胞混培，作用4-6小時(shí)。
4、將細(xì)胞混合液消化取出，洗二次，PI工作液5ul，避光30分鐘后上流式
5、CFSE，PI雙陽(yáng)性的細(xì)胞為被殺傷的靶細(xì)胞，除以靶細(xì)胞總數(shù)，即為殺傷率。

注意事項(xiàng)：
1、CFSE及PI的濃度必須注意，寧低勿高，個(gè)人感覺(jué)，如果標(biāo)高的話(huà)，在4度放一晚好像會(huì)好一些
2、必須設(shè)全陰，CFSE單標(biāo)，PI單標(biāo)，CFSE＋PI雙標(biāo)并同步化的靶細(xì)胞的參照.
3、作用時(shí)間不能太長(zhǎng)，不要超過(guò)8個(gè)小時(shí)。

 

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