熟地黃及其多糖中樞抑制作用研究

摘要:目的:研究熟地黃及其多糖的中樞抑制作用。方法:通過小鼠自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)、抗驚厥實(shí)驗(yàn)、鎮(zhèn)靜催眠實(shí)驗(yàn)觀察熟地黃及其多糖對(duì)中樞的抑制作用。結(jié)果:熟地黃煎液、熟地黃多糖均能夠抑制小鼠的自發(fā)活動(dòng);縮短閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期,延長(zhǎng)睡眠時(shí)間;延緩異煙肼驚厥的發(fā)作潛伏期,減少動(dòng)物死亡數(shù)。結(jié)論:熟地黃煎液、熟地黃多糖對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用。

 

在以往的研究中發(fā)現(xiàn),地黃有一定的中樞抑制作用,但關(guān)于熟地黃的中樞抑制作用尚未見研究報(bào)道。鑒此,我們進(jìn)行了熟地黃及其多糖的中樞抑制作用研究。

 

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品

熟地黃煎液:熟地黃為玄參科植物地黃Rehmanniagluti2nosa Libosch干燥根的加工品。生地黃購自原產(chǎn)地武陟,經(jīng)中藥鑒定教研室陳隨清教授鑒定確認(rèn)。參照《中國(guó)藥典》(2000年版,一部)酒燉法炮制成熟地黃。熟地黃加水煎煮,第一次加入6倍量水,煮沸1 h ,第二、三次均加入4倍量水,煮沸1 h ,合并濾液,濃縮至1∶1(1g/ ml) ,冰箱冷藏(4℃)備用,用時(shí)按需要稀釋。熟地黃多糖:熟地黃干燥品,以95 %乙醇8倍量、6倍量、6倍量依次回流提取4 h、3 h、3 h ,藥渣置通風(fēng)處晾干;藥渣分別加水10倍量、8倍量、8倍量,于90℃～100℃水浴依次溫提4 h、3 h、3 h ,過濾,合并濾液,離心15 min ,得上清液,濃縮至1∶1(1g/ ml) ,用95 %乙醇調(diào)含醇量至80 % ,靜置過夜,抽濾得沉淀。取粗多糖加水溶解,加入等體積30 %三氯乙酸溶液,靜置離心,上清液用0. 01 mol/ L的氫氧化鈉調(diào)p H =7 ,減壓濃縮,濃縮液流水透析,將透析液減壓濃縮至適當(dāng)體積,加入95 %乙醇調(diào)含醇量至80 % ,放置,抽濾,沉淀用無水乙醇、丙酮、無水乙醚依次洗滌,真空干燥,得粗多糖。用時(shí)按需加蒸餾水配成溶液。地西泮:購自河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院,天津制藥廠生產(chǎn),批號(hào): 0305004 ,規(guī)格: 5 mg/片。用時(shí)研成粉末,用0. 5 %CMC - Na配成藥液。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠,豫醫(yī)動(dòng)字410115 ,普通級(jí),體重為(20±2) g,雌雄兼用,購自河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.3 主要儀器和試劑

小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀:成都泰盟科技有限公司生產(chǎn);戊巴比妥鈉: Serva 公司,上海化學(xué)試劑站分裝;異煙肼:上海信誼藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào):040301 ,規(guī)格:100 mg/片。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與給藥

動(dòng)物購入后適應(yīng)性飼養(yǎng)2d ,隨機(jī)分為4組:對(duì)照組,地西泮組,熟地黃多糖組,熟地黃煎液組。各組給藥情況如下:對(duì)照組灌胃生理鹽水;地西泮組前4 d灌胃生理鹽水,后3 d灌胃地西泮藥2. 5 mg·kg^-1·d^-1;熟地黃多糖組前4 d灌胃生理鹽水,后3 d灌胃熟地黃多糖0. 5g·kg^-1·d^-1;熟地黃組灌胃熟地黃水煎液8g·kg^-1·d^-1給藥7 d。給藥期間小鼠自由進(jìn)食飲水。

2.2 自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)于末次給藥60min后進(jìn)行。用小鼠自發(fā)活動(dòng)儀測(cè)定記錄各組小鼠10 min內(nèi)活動(dòng)次數(shù)。

2.3 閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥60 min后,各組小鼠分別腹腔注射戊巴比妥鈉(40 mg·kg- 1) 。以給藥到翻正反射消失的時(shí)間為入睡時(shí)間,即睡眠潛伏期(min) ;從翻正反射消失到恢復(fù)蘇醒的時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間(min) 。觀察記錄實(shí)驗(yàn)期內(nèi)小鼠的睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間,觀察時(shí)間以60 min為限,超過者均以60 min計(jì)算。

2.4 異煙肼致小鼠驚厥實(shí)驗(yàn)

末次給藥60 min后,各組小鼠分別腹腔注射異煙肼(300 mg·kg^-1) 。觀察記錄小鼠60 min內(nèi)出現(xiàn)陣攣性和強(qiáng)直性癲癇的時(shí)間作為發(fā)作潛伏期(min) ,觀察每組動(dòng)物死亡數(shù)。

 

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 熟地黃及其多糖對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響與對(duì)照組比較,地西泮、熟地黃多糖可顯著地減少小鼠自主活動(dòng)次數(shù), P<0. 01 ,P<0. 05 ;熟地黃煎液有減少小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的趨勢(shì)。熟地黃多糖、熟地黃煎液與地西泮三組間比較無顯著性差異(P>0. 05) 。

3.2 對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的影響與對(duì)照組比較,地西泮顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0. 05) ,延長(zhǎng)睡眠時(shí)間(P<0. 01) ;熟地黃多糖可顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0. 05) ,延長(zhǎng)睡眠時(shí)間(P<0. 05) ;熟地黃可顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0. 05) 。熟地黃多糖組、熟地黃煎液組與地西泮組三者組間比較無顯著性差異(P>0. 05) 。3.3 對(duì)異煙肼致小鼠驚厥的影響與對(duì)照組比較,地西泮可顯著地延緩異煙肼驚厥發(fā)作潛伏期(P<0. 05) ;熟地黃多糖有延緩異煙肼驚厥發(fā)作潛伏期作用;熟地黃煎液可顯著地延緩異煙肼驚厥發(fā)作潛伏期(P<0. 05) ;熟地黃多糖組、熟地黃煎液組與地西泮組三者組間比較無顯著性差異(P>0.05) 。三者均能使60 min內(nèi)動(dòng)物死亡數(shù)減少。

 

4 小結(jié)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,熟地黃煎液、熟地黃多糖均能夠抑制小鼠的自發(fā)活動(dòng);縮短閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期,延長(zhǎng)睡眠時(shí)間;延緩異煙肼驚厥的發(fā)作潛伏期,減少動(dòng)物死亡數(shù)。因而,熟地黃煎液、熟地黃多糖對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。