高純度exosomes分離方法
瀏覽次數(shù):7405 發(fā)布日期:2013-11-21
來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
外泌體(Exosomes)是一種直徑在40~100 nm的圓形單層膜結(jié)構(gòu),可由機(jī)體眾多類型細(xì)胞釋放,并廣泛分布于唾液、血漿、乳汁、尿液等體液當(dāng)中。外泌體可攜帶多種蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA,參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、血管新生和腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等過(guò)程。2007 年,Valadi等發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分泌的外泌體中含有生物學(xué)活性的mRNA、microRNA,使得研究人員對(duì)外泌體的研究熱情激增。
傳統(tǒng)的外泌體分離要涉及超速離心,操作繁瑣、過(guò)程冗長(zhǎng),所得到的外泌體純度較低。美國(guó)101Bio提供的系列外泌體分離試劑盒,可從細(xì)胞培養(yǎng)基或血清中富集大量完整的外泌體,試劑盒具有
ü 方便——無(wú)需超速離心;
ü 快捷——不到2個(gè)小時(shí)即可完成外切體分離純化;
ü 高回收率——是超速離心的5~10倍;
ü 高純度——所得外切體純度高達(dá)95% 以上;
ü 僅需2ml的細(xì)胞培養(yǎng)基或200ul血清,即可獲得足夠的外切體用于下游研究。
PureExo®Exosomes Isolation Kit for Cell Culture Media
試劑盒組分
Solution A、Solution B、Solution C和PureExo® Columns
操作步驟
1. 無(wú)血清培養(yǎng)或血清饑餓48小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)液于4℃ 600 g 離心10mins取上清;
2. 在玻璃管中按照比例加入細(xì)胞上清液及ABC混合液搖勻;
3. 于4℃孵育1h后出現(xiàn)分層;
4. 棄上層培養(yǎng)基,并將其余液體轉(zhuǎn)移至EP管;
5. 1000g離心3mins,出現(xiàn)分層,棄上層培養(yǎng)基及下層無(wú)色澄清液體;
6. 上述步驟重復(fù)操作一次;
7. 室溫干燥5~10mins后用1X PBS重懸;
8. 重懸液轉(zhuǎn)移至純化柱中,2000g離心5mins;
9. 收集流出液即為外切體。