細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法、轉(zhuǎn)染效率低的原因及其解決方案介紹

轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)�入�?xì)胞內(nèi)的一種技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)�入�?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染和現(xiàn)在比較常用的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。

 

理想的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等特點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)是目前轉(zhuǎn)染效率最高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。目前非病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)中，轉(zhuǎn)染效率最高的方法是以陽離子非脂性物質(zhì)為主的混合物配方。該類轉(zhuǎn)染物質(zhì)介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染具有廣譜、細(xì)胞毒性小、性能穩(wěn)定等特點(diǎn)，而且不受培養(yǎng)液中的血清和抗生素的干擾，比脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法更方便，因而在轉(zhuǎn)染技術(shù)領(lǐng)域逐漸占據(jù)主流地位。

需要指出的是，無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù)，要獲得最佳的轉(zhuǎn)染結(jié)果，可能都需要對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。轉(zhuǎn)染效果的影響因素很多，如細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和生長狀態(tài)、轉(zhuǎn)染方法、轉(zhuǎn)染操作細(xì)節(jié)等等。遇到問題，需要綜合考慮。