通過高通量計數(shù)提升CAR-T療法的精度

 

免疫細胞療法，特別是CAR-T細胞療法，利用人體免疫系統(tǒng)對抗疾病，尤其是癌癥。CAR-T細胞是經(jīng)過基因修飾的T細胞，旨在靶向并摧毀癌細胞。在CAR-T的制造過程中，EVE™ HT FL等高通量熒光細胞計數(shù)儀起著至關重要的作用。它們評估細胞活力、計數(shù)CAR-T細胞、確保原材料的質(zhì)量控制、優(yōu)化培養(yǎng)條件、確定最佳收獲時間、檢測污染物，并為符合監(jiān)管要求的數(shù)據(jù)記錄提供便利，從而提高CAR-T生產(chǎn)的效率和質(zhì)量。

EVE™ HT FL提高了CAR-T療法的生產(chǎn)效率和質(zhì)量，為這種個性化免疫療法的成功作出了貢獻。

細胞療法：組織細胞療法、免疫細胞療法和干細胞療法

細胞療法包括組織細胞療法、免疫細胞療法和干細胞療法。在生物醫(yī)學領域，它們作為獨立的領域而存在，細胞療法進一步分為組織細胞療法、免疫細胞療法和干細胞療法。另一方面，基因治療被分為免疫細胞基因治療和干細胞基因治療。本文將重點討論免疫細胞療法，特別是CAR-T療法，以及如何在CAR-T生產(chǎn)中應用高通量熒光細胞計數(shù)儀，如 EVE™ HT FL。
 

圖1 生物醫(yī)學分類

什么是免疫細胞療法？

免疫細胞療法，也稱為免疫療法，是一種利用身體免疫系統(tǒng)來對抗疾病的醫(yī)學方法，尤其是癌癥和免疫相關疾病。這種個性化治療包括從患者體內(nèi)提取免疫細胞，在實驗室中對其進行基因改造以增強其靶向能力，然后將它們重新引入患者的血液中。其應用擴展到新藥開發(fā)、毒理學檢測和生物標志物研究。其中一個典型的例子就是CAR-T細胞療法，即通過工程改造使T細胞專門靶向并摧毀癌細胞。免疫細胞療法提供針對個體免疫狀況量身定制的精準醫(yī)學，并已在某些癌癥中顯示出顯著的療效，為治療以前具有挑戰(zhàn)性的疾病開辟了新的可能性。當前的研究旨在擴大其適用性并優(yōu)化安全性和有效性。
 

圖2 CAR-T細胞療法

 

什么是CAR-T細胞？
CAR-T細胞是經(jīng)過基因修飾以產(chǎn)生人工T細胞受體的T細胞。這種創(chuàng)新的免疫療法旨在增強T細胞識別和消除癌細胞的能力。該過程包括從個體中提取T細胞，對其進行基因改變，然后將工程化的CAR-T細胞重新引入患者體內(nèi)，以更有效地靶向和摧毀腫瘤。這些CAR-T細胞既可以來自患者自身的血液(自體)，也可以來自健康供者的T細胞(同種異體)。為了確保安全，CAR-T細胞旨在特異性識別存在于腫瘤上但不識別健康細胞上的抗原。
 

圖3 CAR-T細胞療法

EVE™ HT FL：CAR-T產(chǎn)品的高效、準確和高通量解決方案
當處理PBMC或T細胞等細胞時，準確評估細胞濃度和活力對于在后續(xù)操作中保持質(zhì)量至關重要。由于紅細胞和非細胞碎片等常見污染物，這類樣品中的細胞計數(shù)成為一項具有挑戰(zhàn)性的任務，引入了耗時、主觀性和更高的錯誤可能性等復雜性。
 

圖4 EVE™ HT FL

 

當處理PBMC或T細胞等細胞時，準確評估細胞濃度和活力對于保持后續(xù)程序的質(zhì)量至關重要。由于紅細胞和非細胞碎片等常見污染物，這類樣品中的細胞計數(shù)成為一項具有挑戰(zhàn)性的任務，引入了時間消耗、主觀性和更高的錯誤可能性等復雜性。
 

EVE™ HT FL是一款高通量自動熒光細胞計數(shù)儀，配備明場和兩個熒光通道（AO/DAPI）。
 

AO和DAPI是熒光染料，可對靶細胞的細胞核進行染色。AO是一種可滲透的染料，無論細胞狀況如何，都可以對所有細胞的細胞核進行染色。DAPI是一種不滲透性染料，僅對膜受損的非活性細胞的細胞核進行染色。
 

圖5 EVE™ HT FL的基本計數(shù)原理

 

為了準確評估PBMC或干細胞等細胞類型的活力，建議使用雙熒光染色。該方法可有效排除樣品中的無核細胞（例如紅細胞）、血小板和碎片。在短短3分鐘內(nèi)，可對多達48個樣品進行計數(shù)和分析。
 

EVE™ HT FL如何應用于CAR-T的制造過程？
當處理PBMC或T細胞等細胞時，準確評估細胞濃度和活力對于保持后續(xù)程序的質(zhì)量至關重要。由于紅細胞和非細胞等常見污染物，這些樣品中的細胞計數(shù)成為一項具有挑戰(zhàn)性的任務。

 
1. 細胞活力評估

EVE™ HT FL是一款高通量熒光細胞計數(shù)儀，能夠快速準確地測定活CAR-T細胞的百分比，即實時監(jiān)測細胞活力。此外，它還可以實時監(jiān)測細胞生長和增殖。在CAR-T生產(chǎn)中通常需要大量T細胞，這種能力對于確保最終CAR-T產(chǎn)品的整體質(zhì)量至關重要。通過跟蹤這些參數(shù)，研究人員可以優(yōu)化培養(yǎng)條件，以確保產(chǎn)生足夠數(shù)量的活CAR-T細胞。

 
2. CAR-T細胞計數(shù)

EVE™ HT FL簡化了CAR-T細胞的計數(shù)過程。通過自動細胞計數(shù)，它擅長計數(shù)總細胞計數(shù)，包括活細胞和非活細胞，進一步促進了細胞濃度的測定。這允許在制造過程的各個階段準確接種細胞。這對于保持所需的細胞密度和優(yōu)化下游工藝至關重要。

 
3. 起始材料的質(zhì)量控制

CAR-T療法的成功在很大程度上取決于起始T細胞群的質(zhì)量。EVE™ HT FL有助于全面評估細胞形態(tài)、大小和整體質(zhì)量。確保起始T細胞符合預定標準對于一致和有效的CAR-T生產(chǎn)至關重要。

 
4. 優(yōu)化培養(yǎng)條件

對細胞培養(yǎng)物的持續(xù)監(jiān)測有助于深入了解不同培養(yǎng)條件對CAR-T細胞生長和健康的影響。研究人員可以使用這些信息來優(yōu)化培養(yǎng)基組成、孵育參數(shù)和其他變量，從而提高CAR-T細胞的生產(chǎn)效率。

 
5. 確定最佳收獲時間

EVE™ HT FL有助于確定CAR-T細胞的最佳收獲時間。通過在培養(yǎng)期間監(jiān)測細胞活力，研究人員可以確定細胞表現(xiàn)出最大活力且最適合收獲的時間點，從而優(yōu)化整體生產(chǎn)時間表。

 
6. 檢測污染物或異常

AO/DAPI染色可以突出顯示細胞群中的污染物或異常�？梢钥焖僮R別細胞形態(tài)的偏差或不需要的細胞類型的存在，從而可以采取糾正措施來保持CAR-T細胞產(chǎn)品的純度。

 
結論

EVE™ HT FL可以應用于CAR-T生產(chǎn)，提供評估細胞活力、計數(shù)細胞計數(shù)、監(jiān)測細胞生長和確保CAR-T細胞產(chǎn)品整體質(zhì)量的功能。其高通量特性有助于提高生產(chǎn)過程的效率和成功，最終影響CAR-T細胞療法的治療效果。