小鼠脾臟樹(shù)突狀細(xì)胞的分離方法簡(jiǎn)介

小鼠脾臟DC是研究最多的淋巴組織DC，其特征為組成性表達(dá)MHC-II類(lèi)分子和CD11c。該細(xì)胞群可進(jìn)一步分為三群：主要分布于邊緣區(qū)的CD4+CD8-CD11b+DC，主要分布于T細(xì)胞區(qū)的CD4-CD8+CD11b-DC和雙陰性DC----CD4-CD8+CD11b+。其中，CD8+DC表達(dá)CD1d和DEC-205。我們可以根據(jù)需要選擇不同的方法將脾臟DC分選出來(lái)。

     小鼠脾臟DC在體外可黏附于玻璃或塑料表面，但培養(yǎng)18-24h后，其黏附能力喪失，借此可與巨噬細(xì)胞分離。該方法無(wú)需特殊試劑，不需要進(jìn)行密度梯度離心，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)。但用此方法獲取的DC數(shù)量少，純度低，而且分離所得的DC處于不同的分化階段，無(wú)法滿(mǎn)足精細(xì)實(shí)驗(yàn)的需要。

     CD11c表達(dá)于所有已知小鼠DC表面，所以將包被了磁珠的CD11c抗體與小鼠淋巴組織或非淋巴組織懸液共孵育并置于磁場(chǎng)后，結(jié)合了CD11c抗體的細(xì)胞將留在分選柱中，脫離磁場(chǎng)后可分離得到CD11c陽(yáng)性的DC。該方法簡(jiǎn)單易行，若操作得當(dāng)，細(xì)胞純度可以達(dá)到95%以上。但需購(gòu)置相應(yīng)分選設(shè)備及試劑，花費(fèi)較高。

    DC表面表達(dá)多種相對(duì)特異性的表面標(biāo)志，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選用某些特定表面標(biāo)志的單克隆熒光抗體作標(biāo)記，明確目的細(xì)胞群，通過(guò)流式細(xì)胞儀做自動(dòng)分選。
該方法可以根據(jù)多個(gè)標(biāo)記進(jìn)行細(xì)胞分選，彌補(bǔ)了MACS分選的不足，而且分離得到的DC細(xì)胞純度更高。但是采用FCM分選目前存在的主要問(wèn)題是DC的種類(lèi)很多，發(fā)育的過(guò)程和表面特征標(biāo)志目前尚未完全清楚。因此，在做DC分離時(shí)，必須視標(biāo)本來(lái)源及目的細(xì)胞選擇合適的單克隆抗體精選標(biāo)記。另外，進(jìn)行流式分選必須購(gòu)置具有分選功能的流式細(xì)胞儀，價(jià)格昂貴，對(duì)操作人員的技術(shù)也有較高要求。