雙特異性抗體(bsAbs)在癌癥治療領(lǐng)域最新進(jìn)展概述與未來(lái)應(yīng)用展望

作者：彪彪 文章來(lái)源抗體圈 2024年11月07日 15:25 湖北

摘要：雙特異性抗體（bsAbs）能夠?qū)崿F(xiàn)傳統(tǒng)基于IgG的抗體無(wú)法達(dá)到的新型作用機(jī)制和/或治療應(yīng)用。因此，這些分子在過(guò)去十年中引起了極大的興趣，并且截至2023年底，已有14種bsAbs獲得批準(zhǔn)：11種用于治療癌癥，3種用于非腫瘤學(xué)指征。bsAbs有不同格式，針對(duì)不同的目標(biāo)，并通過(guò)不同的分子機(jī)制介導(dǎo)抗癌功能。在這里，我們提供了bsAbs在癌癥治療領(lǐng)域最新進(jìn)展的概述。我們專注于已批準(zhǔn)或處于臨床開(kāi)發(fā)中的bsAbs，包括bsAb介導(dǎo)的信號(hào)通路雙重調(diào)節(jié)劑、腫瘤靶向受體激動(dòng)劑、bsAb-藥物偶聯(lián)物、雙特異性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和先天免疫細(xì)胞的招募者，以及雙特異性檢查點(diǎn)抑制劑和共刺激因子。最后，我們對(duì)處于更早開(kāi)發(fā)階段的下一代bsAbs進(jìn)行了展望，包括三特異性抗體、bsAb前藥、誘導(dǎo)腫瘤目標(biāo)降解的bsAbs以及作為細(xì)胞因子模擬物的bsAbs。

引言 
bsAbs用于雙重受體抑制 bsAbs用于配體-受體抑制 bsAbs用于受體激活 bsAbs用于靶向載荷遞送 bsAbs用于癌癥免疫治療、 新興概念 、展望，雙特異性抗體通過(guò)新生兒Fc受體（FcRn）循環(huán)利用。Fc部分的突變可以改變與FcRn的結(jié)合，從而改變抗體的半衰期。在不包含F(xiàn)c部分的bsAbs中，可以通過(guò)其他方式實(shí)現(xiàn)類似IgG的藥代動(dòng)力學(xué)，例如結(jié)合到人血清白蛋白（HSA）或其他可以延長(zhǎng)半衰期的分子。

目前有超過(guò)幾百種不同類型的bsAb格式，其中多種格式在已批準(zhǔn)和處于臨床開(kāi)發(fā)中的分子中使用。目前，大多數(shù)已批準(zhǔn)的bsAbs和處于藥物開(kāi)發(fā)高級(jí)階段的分子主要用于癌癥免疫治療。其他針對(duì)新型藥物遞送的實(shí)體也在開(kāi)發(fā)中，例如基于bsAb的抗體-藥物偶聯(lián)物（bsADCs）或雙重靶向與癌癥相關(guān)的信號(hào)通路（圖1）。我們最近在http://ClinicalTrials.gov、Cortellis和The Antibody Society的數(shù)據(jù)搜索顯示，有超過(guò)200種不同的雙特異性分子的300多項(xiàng)臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中，其中約75%用于治療實(shí)體瘤，25%用于治療血液惡性腫瘤（圖1）。

目前有十種bsAb藥物已獲批準(zhǔn)用于癌癥治療，其中九種在美國(guó)和/或歐洲獲批準(zhǔn)，卡多尼利單抗在中國(guó)獲批準(zhǔn)。在這十種bsAbs中，有九種可以歸類為TCEs�？ㄋ�莫單抗是首個(gè)獲批準(zhǔn)的bsAb，于2013年退出市場(chǎng)（表1和圖2）。

值得注意的是，今天在臨床開(kāi)發(fā)中的相當(dāng)一部分bsAbs已經(jīng)處于后期階段（第二階段和第三階段）。我們發(fā)現(xiàn)，用于治療實(shí)體瘤的bsAbs主要由免疫調(diào)節(jié)劑主導(dǎo)，包括雙重CPIs（約45%）和TCEs（約33%），其次是針對(duì)雙重通路的bsAbs、ICEs和雙重ADCs。相比之下，TCEs是用于治療血液惡性腫瘤的主要bsAbs類別（約75%），其次是ICEs、雙重CPIs和NKCEs（圖3）。我們數(shù)據(jù)集中的bsAbs針對(duì)60多個(gè)不同的目標(biāo)，使用超過(guò)50種不同的bsAb格式，涉及100多種目標(biāo)組合。

然而，我們承認(rèn)，該領(lǐng)域的增長(zhǎng)速度很快，新的bsAbs，可能具有新的目標(biāo)和格式，已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)，自我們分析以來(lái)。盡管如此，本綜述旨在提供一份基于MoA的全面概述，介紹作為癌癥治療開(kāi)發(fā)的bsAbs的最新進(jìn)展，重點(diǎn)關(guān)注截至2023年底在同行評(píng)審出版物中描述的bsAbs。雙受體抑制的bsAbs 許多參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的細(xì)胞表面蛋白，如RTKs及其相關(guān)受體，是抗體基療法的驗(yàn)證目標(biāo)。幾十年前，對(duì)這些蛋白的研究，包括歷史上的先行者表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR；也稱為HER1）、HER2、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和針對(duì)它們的抗體，為幾乎所有后續(xù)的抗體基治療發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。盡管結(jié)合一個(gè)定義的信號(hào)實(shí)體的抗體基療法相當(dāng)有效，但與疾病相關(guān)的表現(xiàn)型通常由多個(gè)通路觸發(fā)。這種冗余允許細(xì)胞通過(guò)使用其他補(bǔ)償性信號(hào)通路來(lái)克服單一目標(biāo)或通路的藥理學(xué)生長(zhǎng)抑制或誘導(dǎo)細(xì)胞毒性。同時(shí)調(diào)節(jié)不同的與疾病相關(guān)的信號(hào)受體和/或通路的bsAbs可以減少或克服這種限制。Amivantamab（JNJ-61186372）靶向EGFR和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（MET）。兩種受體都會(huì)觸發(fā)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的增殖，因此，阻斷兩者可以比僅阻斷一個(gè)通路更有效地抑制NSCLC的生長(zhǎng)。Amivantamab已獲批準(zhǔn)用于治療攜帶EGFR外顯子20插入突變的NSCLC亞型。

圖1 | 用于癌癥治療的雙特異性抗體在臨床開(kāi)發(fā)中。

目前有200多種雙特異性抗體（bsAbs）正在進(jìn)行臨床開(kāi)發(fā)，根據(jù)癌癥類型、臨床階段和作用模式進(jìn)行分組。正在進(jìn)行臨床開(kāi)發(fā)的bsAbs中有50%處于II期和III期或已經(jīng)獲批。大約四分之三的bsAbs被開(kāi)發(fā)用于治療實(shí)體瘤，實(shí)體瘤治療主要由T細(xì)胞招募劑（TCEs；32.9%）和具有檢查點(diǎn)抑制和/或免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制（MoAs）的bsAbs（45.1%）所主導(dǎo)。相比之下，血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療主要由TCEs（75%）和其他MoAs（21.9%）所主導(dǎo)，這些MoAs涉及免疫學(xué)活動(dòng)，如通過(guò)檢查點(diǎn)抑制和/或免疫調(diào)節(jié)激活自然殺傷細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞，這歸功于高度腫瘤選擇性或譜系特異性抗原的可用性。值得注意的是，約有10%用于實(shí)體瘤治療的bsAbs采用雙重信號(hào)抑制。迄今為止，正在開(kāi)發(fā)的bsAb抗體-藥物偶聯(lián)物（ADCs）用于治療實(shí)體瘤。CPI，檢查點(diǎn)抑制劑；ICE，先天細(xì)胞招募劑；NKCE，自然殺傷細(xì)胞招募劑。

雙特異性抗體用于配體-受體抑制 
受體激活可以通過(guò)干擾受體二聚體化或復(fù)合物形成，或通過(guò)阻斷受體的配體結(jié)合位點(diǎn)來(lái)抑制。在癌癥中，通常來(lái)自幾個(gè)互補(bǔ)或補(bǔ)償通路的配體和受體有助于腫瘤進(jìn)展和治療抗性。bsAbs可以同時(shí)阻斷兩種不同的配體，無(wú)論是可溶的還是細(xì)胞膜結(jié)合的，或者是配體和受體的組合。這種方法不僅用bsAbs來(lái)解決，也用雙特異性或雙位點(diǎn)基于支架的結(jié)合劑來(lái)解決，這里我們不包括。雙重靶向VEGF和血管素2（ANG2）以阻斷分別參與血管生成的VEGFR和血管素-1受體（TIE2）的激活，已成為包括微轉(zhuǎn)移的血管生成轉(zhuǎn)換在內(nèi)的實(shí)體瘤中幾項(xiàng)臨床試驗(yàn)的主題。BI836880是一種三特異性納米抗體（Nb）融合蛋白，由三個(gè)靶向VEGFA、ANG2和HSA的納米抗體組成，后者用于延長(zhǎng)其血清半衰期。這種化合物目前正在對(duì)頭頸鱗狀細(xì)胞癌、NSCLC和其他實(shí)體瘤患者進(jìn)行I期研究。值得注意的是，vanucizumab，一種靶向VEGFA和ANG2的bsAb，在與化療聯(lián)合使用的臨床前模型中顯示出抗腫瘤、抗血管生成和抗轉(zhuǎn)移效應(yīng)，但在與化療聯(lián)合使用時(shí)，并未在結(jié)直腸癌患者中提高無(wú)進(jìn)展生存期，超過(guò)VEGF抑制。將VEGF抑制與另一種拮抗活性相結(jié)合的概念進(jìn)一步應(yīng)用于靶向VEGF和Delta樣規(guī)范Notch配體4（DLL4）的bsAbs。DLL4是一種細(xì)胞表面配體，激活Notch-1受體通路，該通路在腫瘤血管生成中起著核心作用。幾種靶向VEGF和DLL4的雙特異性抗體已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)，包括navicixizumab、dilpacimab和CTX009/ABL001。Navicixizumab是一種四價(jià)雙特異性抗體，具有四個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，其中兩個(gè)基于單鏈可變片段（scFv）融合，它在與紫杉醇聯(lián)合使用時(shí)在鉑類耐藥卵巢癌患者中展示了有希望的臨床活性，并具有可管理的毒性，表明這種方法可能在某些適應(yīng)癥中提供臨床益處。相比之下，另一項(xiàng)針對(duì)四價(jià)雙特異性抗體dilpacimab的II期研究，與亞葉酸、氟尿嘧啶和伊立替康（FOLFIRI）聯(lián)合使用，揭示了安全問(wèn)題。

表1 | 批準(zhǔn)用于癌癥治療的雙特異性抗體

ADCC，抗體依賴性細(xì)胞毒性；ALL，急性淋巴細(xì)胞性白血病；BCMA，B細(xì)胞成熟抗原；BiTE，雙特異性T細(xì)胞招募劑；bsAb，雙特異性抗體；DLBCL，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤；EGFR，表皮生長(zhǎng)因子受體；EpCAM，上皮細(xì)胞粘附分子；GPRC5D，G蛋白偶聯(lián)受體C類5成員D；MoA，作用機(jī)制；NSCLC，非小細(xì)胞肺癌；NHL，非霍奇金淋巴瘤；scFv，單鏈可變片段；TCR，T細(xì)胞受體；TDCC，T細(xì)胞依賴性細(xì)胞毒性。批準(zhǔn)區(qū)域限于美國(guó)、歐洲聯(lián)盟（EU）、日本和中國(guó)；產(chǎn)品也可能在其他國(guó)家獲得批準(zhǔn)。狀態(tài)截至2023年底。

靶向VEGF和PDL1或PD1的雙特異性抗體 
基于VEGF抗體和免疫檢查點(diǎn)抑制劑（CPI）聯(lián)合治療的積極結(jié)果，上述概念進(jìn)一步適應(yīng)于設(shè)計(jì)靶向VEGF和腫瘤細(xì)胞上的PDL1或T細(xì)胞上的PD1的雙特異性抗體，從而將抗血管生成與免疫腫瘤學(xué)方法相結(jié)合。使用這種方法最先進(jìn)的分子是ivonescimab（AK112），它針對(duì)PD1和VEGF。目前，ivonescimab的上市申請(qǐng)正在中國(guó)接受監(jiān)管審查。其他雙特異性抗體靶向PDL1和VEGF，包括PM8002，目前正在進(jìn)行II/III期研究（NCT05756972），針對(duì)NSCLC患者。受體激活的雙特異性抗體 許多抗腫瘤反應(yīng)是通過(guò)激活細(xì)胞表面受體介導(dǎo)的，包括免疫反應(yīng)或通過(guò)誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞死亡。癌癥治療的一種方法是通過(guò)將受體激活配體（如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和（共）免疫刺激配體）融合到抗體或抗體片段上，實(shí)現(xiàn)受體激活配體的靶向遞送，以誘導(dǎo)局部或組織特異性的激動(dòng)活性，從而引發(fā)細(xì)胞反應(yīng)。越來(lái)越多的這些抗體-配體融合蛋白正在進(jìn)入臨床試驗(yàn)。受體激活也可以通過(guò)激動(dòng)性抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)。腫瘤壞死因子（TNF）超家族的成員，包括死亡配體（如TNF配體超家族成員10（TNFSF10）；也稱為TRAIL）及其各自的死亡受體（如TRAIL受體1和2；也稱為DR4和DR5），或具有免疫細(xì)胞共刺激活性的配體（如TNFSF9；也稱為4-1BBL）及其受體（如TNFRSF9；也稱為4-1BB或CD137）在癌癥治療中引起了特別關(guān)注。然而，單克隆抗體在臨床試驗(yàn)中取得了相當(dāng)令人失望的結(jié)果。原因是許多TNFRSFs需要超過(guò)兩個(gè)受體的交聯(lián)以激活，這只能通過(guò)Fc-FcγR介導(dǎo)的抗體在細(xì)胞表面的超聚集來(lái)實(shí)現(xiàn)，因此依賴于TME中表達(dá)足夠數(shù)量FcγR的先天免疫細(xì)胞。作為替代方案，針對(duì)目標(biāo)抗原和TNFRSF成員的雙特異性抗體已被證明可以作為強(qiáng)大且腫瘤選擇性的激動(dòng)分子，模仿表面展示配體的活性。這尤其適用于DR4和DR5，DR5需要多個(gè)受體的聚集才能激活。值得注意的是，針對(duì)DR5和表面抗原的雙特異性抗體，如成纖維細(xì)胞激活蛋白-α（FAPα；也稱為脯氨酸內(nèi)肽酶FAP）、鈣粘蛋白17（CDH17）或葉酸受體-α（FRα），不僅有效地誘導(dǎo)受體激活，還避免了通過(guò)誘餌受體的隔離50。RG7386（RO6874813），一種針對(duì)癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞上的FAPα和DR5的四價(jià)雙特異性抗體，在體外和體內(nèi)在表達(dá)FAPα的基質(zhì)的小鼠中觸發(fā)了強(qiáng)效且選擇性的腫瘤細(xì)胞殺傷，并已進(jìn)入臨床測(cè)試，但由于戰(zhàn)略投資組合優(yōu)先級(jí)而隨后中止。此外，BI905711，一種針對(duì)DR5和CDH17的四價(jià)雙特異性IgG-scFv融合蛋白，目前正在進(jìn)行I期臨床研究，顯示出在CDH17陽(yáng)性目標(biāo)細(xì)胞上的效力比單克隆抗體提高了1000倍以上，轉(zhuǎn)化為在結(jié)直腸癌模型中的強(qiáng)效且選擇性的抗腫瘤活性。相同的格式用于針對(duì)DR5和FOLR1的雙特異性抗體，F(xiàn)OLR1是一種富集于卵巢癌的受體，已被證明介導(dǎo)順式（在同一細(xì)胞上）和反式（在兩個(gè)不同細(xì)胞上）的細(xì)胞毒性，其中FOLR1作為有效DR5激活的聚集點(diǎn)。從概念上講，這種MoA也可以轉(zhuǎn)移到依賴于受體聚集的TNFRSF家族的共刺激成員，包括4-1BB、OX40和CD40（見(jiàn)圖3），使用針對(duì)腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）的雙特異性抗體，但也針對(duì)其他目標(biāo)，如PDL1，從而將共刺激與檢查點(diǎn)抑制相結(jié)合（見(jiàn)下文）。

用于靶向載荷遞送的雙特異性抗體 
存在兩種概念上不同的方法，用于使用雙特異性抗體進(jìn)行有效載荷（如細(xì)胞毒素或放射性）的靶向遞送。第一種方法，預(yù)靶向治療，使用雙特異性抗體的一個(gè)結(jié)合特異性來(lái)靶向腫瘤細(xì)胞，另一個(gè)結(jié)合特異性隨后捕獲腫瘤上的載荷。這類雙特異性抗體結(jié)合到腫瘤上的癌癥靶標(biāo)，如癌胚抗原（CEACAM5）或HER2，然后捕獲由雙特異性抗體的第二個(gè)結(jié)合特異性識(shí)別的放射性標(biāo)記載荷/復(fù)合物。

圖2 | 已批準(zhǔn)用于癌癥治療的雙特異性抗體概覽。

a, 雙特異性T細(xì)胞招募劑（TCEs）。
b, 其他雙特異性抗體（bsAbs）（非T細(xì)胞招募劑（非TCEs））。
11種已批準(zhǔn)的bsAbs中有6種具有IgG樣結(jié)構(gòu)，由2條重鏈（恒定區(qū)域以深灰色顯示，Vh結(jié)構(gòu)域以深藍(lán)色或深紅色顯示）和2條輕鏈（恒定結(jié)構(gòu)域以淺灰色顯示，Vl結(jié)構(gòu)域以淺藍(lán)色或淺紅色顯示）組成。它們大多數(shù)具有1+1的化學(xué)計(jì)量比 —— 每個(gè)抗原一個(gè)結(jié)合位點(diǎn) —— 還有一個(gè)TCE通過(guò)將一個(gè)額外的Fab片段融合到一條重鏈上，利用2+1的化學(xué)計(jì)量比。其他的bsAbs要么是不含F(xiàn)c的融合蛋白，由兩個(gè)單鏈可變片段（scFv）片段組成（blinatumomab），要么是將scFv片段與T細(xì)胞受體（TCR）片段融合，或者是具有2+2化學(xué)計(jì)量比的IgG-scFv融合蛋白。除了由小鼠和大鼠雜交瘤細(xì)胞技術(shù)生產(chǎn)的catumaxomab外，所有其他的bsAbs都是通過(guò)重組技術(shù)生產(chǎn)的。對(duì)于IgG樣異二聚體分子，通過(guò)在CH3域使用突變來(lái)強(qiáng)制異二聚體化 —— 如旋鈕-入洞技術(shù) —— 或控制的Fab臂交換（cFAE），解決了兩種不同重鏈的正確組裝問(wèn)題，cFAE還允許從兩種不同的單特異性IgG組裝IgG樣分子。cFAE還解決了輕鏈問(wèn)題，即輕鏈和重鏈的配對(duì)�；蛘�，如CrossMab方法所示，對(duì)Fab臂進(jìn)行進(jìn)一步的修改，以強(qiáng)制正確的輕鏈和重鏈配對(duì)。值得注意的是，所有重組IgG樣bsAbs都包含一個(gè)具有沉默或減少效應(yīng)功能的Fc區(qū)域，這是通過(guò)在鉸鏈/CH2域引入突變來(lái)避免或減少Fcγ受體和補(bǔ)體結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)的。BCMA，B細(xì)胞成熟抗原；EGFR，表皮生長(zhǎng)因子受體；EpCAM，上皮細(xì)胞粘附分子；GPRC5D，G蛋白偶聯(lián)受體C類5成員D。最近，被稱為SADA的雙特異性抗體利用改良的p53四聚體化域來(lái)延長(zhǎng)GD2×DOTA在腫瘤中的滯留時(shí)間。

GD2×DOTA是一種雙特異性抗體，能夠識(shí)別在癌癥中高表達(dá)的二唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GD2，以及放射性載荷177Lu-DOTA，在腫瘤微環(huán)境中組裝并滯留在那里，但沒(méi)有四聚體化，它會(huì)迅速?gòu)闹車�清除，因�(yàn)樗�缺乏半衰期延長(zhǎng)。到目前為止，很少有臨床試驗(yàn)中的雙特異性抗體使用這種MoA，可能是由于與預(yù)靶向放射性相關(guān)的復(fù)雜物流限制了其普遍適用性。

圖3 | 目前正在臨床試驗(yàn)中的雙特異性抗體的作用機(jī)制。

a, 通過(guò)受體阻斷兩種不同的信號(hào)受體（以不同顏色表示）來(lái)抑制信號(hào)傳導(dǎo)。
b, 通過(guò)抑制可溶性配體（藍(lán)色）和受體來(lái)抑制信號(hào)。
c, 通過(guò)雙重阻斷兩種不同的配體來(lái)抑制信號(hào)。
d, 通過(guò)雙特異性抗體（bsAb）藥物偶聯(lián)物（偶聯(lián)物以淺藍(lán)色表示）進(jìn)行藥物傳遞。
e, 針對(duì)性阻斷“別吃我信號(hào)”（CD47–SIRPα相互作用），導(dǎo)致巨噬細(xì)胞的吞噬作用。
f, 結(jié)合檢查點(diǎn)抑制，阻斷“別吃我信號(hào)”。
g, 通過(guò)T細(xì)胞受體（TCR）上的CD3或自然殺傷細(xì)胞上的CD16（FcγRIIIa）激活效應(yīng)細(xì)胞。
h, 腫瘤細(xì)胞結(jié)合介導(dǎo)的免疫細(xì)胞（共）刺激。
i, PDL1結(jié)合介導(dǎo)的免疫細(xì)胞（共）刺激。
j, 雙重免疫細(xì)胞共刺激。
k, 腫瘤靶向PDL1途徑抑制。
l, 腫瘤靶向PD1途徑抑制。
m, 檢查點(diǎn)結(jié)合介導(dǎo)的免疫細(xì)胞（共）刺激。
n, 雙重檢查點(diǎn)抑制。
o, 通過(guò)配體阻斷實(shí)現(xiàn)雙重檢查點(diǎn)和可溶性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGFβ）信號(hào)的抑制。展示了用于實(shí)體瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤的目標(biāo)分子和腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）的例子。
注意：bsAbs可以同時(shí)發(fā)揮多種作用機(jī)制（MoAs）。Ang2，血管生成素2；APC，抗原呈遞細(xì)胞；BCMA，B細(xì)胞成熟抗原；CDH17，鈣粘蛋白17；DLL4，典型Notch配體4；EGFR，表皮生長(zhǎng)因子受體；EpCAM，上皮細(xì)胞粘附分子；FRα，葉酸受體α；GPRC5D，G蛋白偶聯(lián)受體C類5成員D；HLA，人類白細(xì)胞抗原；ICOS，誘導(dǎo)性T細(xì)胞共刺激因子；LAG3，淋巴細(xì)胞相關(guān)基因3；TIGIT，具有免疫球蛋白和ITIM結(jié)構(gòu)域的T細(xì)胞免疫受體；VEGF，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。雙特異性抗體藥物偶聯(lián)物 第二種方法通過(guò)同時(shí)靶向腫瘤細(xì)胞表面的兩個(gè)表位或兩個(gè)目標(biāo)，實(shí)現(xiàn)了通過(guò)雙特異性抗體藥物偶聯(lián)物（bsADCs）傳遞細(xì)胞毒素載荷的特異性靶向。處于臨床開(kāi)發(fā)中的bsADCs的例子包括zanidatamab zovodotin（ZW49），這是一種雙特異性HER2結(jié)合抗體zanidatamab與auristatin衍生的細(xì)胞毒素載荷偶聯(lián)，雙特異性MET×MET bsADC REGN5093或izalontaxab brengitecan（BL-B01D1），一種EGFR×HER3 bsAb與一種新型TOPO-I抑制劑偶聯(lián)（NCT05194982）（表2）。

雙特異性抗體用于癌癥免疫治療 
大多數(shù)用于癌癥免疫治療的雙特異性抗體通過(guò)T細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的自然或內(nèi)源性免疫發(fā)揮作用，例如通過(guò)增強(qiáng)現(xiàn)有的抗腫瘤反應(yīng)和/或克服檢查點(diǎn)抑制，或通過(guò)提供合成免疫，例如通過(guò)bsAb驅(qū)動(dòng)的免疫細(xì)胞的參與、激活和招募（圖3）。在這一部分中，我們提供了包括CPIs、效應(yīng)細(xì)胞招募劑（包括TCEs和ICEs）和共刺激雙特異性抗體在內(nèi)的最突出的MoAs的概述。雙重CPIs 許多干擾免疫檢查點(diǎn)（如CTLA4或PD1/PDL1）的單特異性抗體已獲批準(zhǔn)用于癌癥免疫治療，包括ipilimumab、tremelimumab、nivolumab、pembrolizumab、atezolizumab、avelumab、durvalumab或cemiplimab。將免疫檢查點(diǎn)抑制抗體治療擴(kuò)展到包括雙特異性抗體可能會(huì)減少不良副作用并提高觀察到的單特異性抗體治療的療效。第一個(gè)方面，檢查點(diǎn)抑制的安全性，包括預(yù)防自身免疫相關(guān)事件和/或不希望的免疫細(xì)胞激活。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，正在開(kāi)發(fā)針對(duì)檢查點(diǎn)抑制功能和TAAs（如RTKs）的雙特異性抗體，目的是將其活動(dòng)更優(yōu)先地集中在腫瘤上，正在開(kāi)發(fā)中。第二個(gè)方面，檢查點(diǎn)免疫治療的療效，通過(guò)雙特異性抗體同時(shí)靶向兩種不同的檢查點(diǎn)蛋白來(lái)提高療效并降低抗性的可能性，或提供互補(bǔ)的免疫刺激信號(hào)。值得注意的是，這些雙特異性抗體的共同設(shè)計(jì)原則是提高對(duì)表達(dá)兩種檢查點(diǎn)蛋白的T細(xì)胞的選擇性，如CTLA4/PD1或PD1/淋巴細(xì)胞相關(guān)基因3（LAG3），這些蛋白可能更具腫瘤反應(yīng)性，目標(biāo)是提供比單獨(dú)檢查點(diǎn)阻斷更優(yōu)越的治療指數(shù)。

表2 | 晚期臨床開(kāi)發(fā)中選擇的雙特異性抗體概覽

BiTE，雙特異性T細(xì)胞招募劑；BCMA，B細(xì)胞成熟抗原；bsAb，雙特異性抗體；BTC，膽管癌；cL，普通輕鏈；DART，雙親和重定向；DLL4，類似Delta的典型Notch配體4；EGFR，表皮生長(zhǎng)因子受體；EpCAM，上皮細(xì)胞粘附分子；Fchet，異二聚體化Fc；LAG3，淋巴細(xì)胞相關(guān)基因3；Nb，納米抗體；NHL，非霍奇金淋巴瘤；NSCLC，非小細(xì)胞肺癌；PDC，胰腺導(dǎo)管腺癌；scFv，單鏈可變片段；TIGIT，具有免疫球蛋白和ITIM結(jié)構(gòu)域的T細(xì)胞免疫受體；TGFβ，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；VEGF，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。a晚期包括關(guān)鍵性II期、II/III期和III期臨床研究。例如，通過(guò)降低自身免疫不良事件的發(fā)生率 —— 而不是與聯(lián)合檢查點(diǎn)阻斷相比。探索腫瘤靶向檢查點(diǎn)抑制的工作包括開(kāi)發(fā)雙特異性抗體，這些抗體靶向腫瘤細(xì)胞表面的HER家族RTKs，并結(jié)合PD1/PDL1信號(hào)通路的阻斷作為第二功能，從而將PDL1結(jié)合劑定向到腫瘤細(xì)胞。這些分子的特定腫瘤靶向?qū)е铝藢?duì)表達(dá)EGFR的腫瘤細(xì)胞更具特異性和增強(qiáng)的活性。類似地，一種特別結(jié)合HER2和PDL1的雙特異性抗體被證明可以在HER2表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中特異性阻斷PDL1活性，從而比單獨(dú)使用每個(gè)實(shí)體或在不作為雙特異性抗體結(jié)合時(shí)聯(lián)合應(yīng)用產(chǎn)生更大的治療效果。另一種雙特異性抗體介導(dǎo)的靶向免疫治療方法包括將PDL1阻斷與識(shí)別黑色素瘤上的軟骨素硫酸蛋白聚糖4（CSPG4）的結(jié)合物相結(jié)合。特定的腫瘤靶向增強(qiáng)了抗腫瘤T細(xì)胞的特異性、激活狀態(tài)和療效。概念上相關(guān)的方法包括將PDL1結(jié)合物與黑色素細(xì)胞刺激激素化學(xué)偶聯(lián)。通過(guò)這種方式，PDL1抑制活性被定向到黑色素瘤細(xì)胞上的黑色素皮質(zhì)素-1受體。同時(shí)靶向兩個(gè)檢查點(diǎn)蛋白而不額外包括常見(jiàn)的腫瘤細(xì)胞表面靶標(biāo)的雙特異性抗體的例子包括同時(shí)結(jié)合腫瘤細(xì)胞上的PD1和PDL1的雙特異性抗體。Wan等人分析了這種雙特異性抗體在高級(jí)別漿液性卵巢癌類器官與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)中引發(fā)的聯(lián)合活性。與單特異性結(jié)合物相比，雙特異性抗體介導(dǎo)了優(yōu)越的療效，并在T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞中誘導(dǎo)了表型變化，包括激活狀態(tài)和細(xì)胞毒性的改變。雙特異性抗體LY3434172也采用了這種方法。通過(guò)完全抑制PD1/PDL1途徑，LY3434172顯示出比每個(gè)親本抗體或兩者組合更大的抗腫瘤活性，再次證明以雙特異性抗體形式的結(jié)合很重要，并且可以增加療效。超越PD1/PDL1方法的界限，包括CTLA4在內(nèi)的其他免疫受體的雙特異性抗體正在開(kāi)發(fā)或已獲批準(zhǔn)。同時(shí)靶向PD1和CTLA4是雙特異性抗體cadonilimab的作用機(jī)制。Cadonilimab由于四價(jià)性，介導(dǎo)了對(duì)高密度PD1和CTLA4的增加親和力驅(qū)動(dòng)的目標(biāo)結(jié)合，這與Fc突變以廢除FcγR結(jié)合相結(jié)合，可能是其有利的治療指數(shù)的基礎(chǔ)。值得注意的是，cadonilimab還在PD1+和CTLA4+ T細(xì)胞之間介導(dǎo)了跨結(jié)合。在晚期實(shí)體瘤患者的I/Ib期研究中，cadonilimab顯示出抗腫瘤活性和有利的安全性概況，免疫相關(guān)不良事件的發(fā)生率低。Cadonilimab已在中國(guó)獲批準(zhǔn)用于治療在鉑類化療后或化療期間進(jìn)展的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性宮頸癌。其他在高級(jí)臨床試驗(yàn)中結(jié)合相同特異性的雙特異性抗體是MGD019和MEDI5752。MGD019結(jié)合了PD1和CTLA4結(jié)合物，在進(jìn)行中的臨床研究中觀察到可接受的安全性和組合阻斷以及在多種實(shí)體瘤中的客觀反應(yīng)。MEDI5752目前正在進(jìn)行臨床評(píng)估，它結(jié)合了PD1和CTLA4，并顯示了PD1介導(dǎo)的靶向，因?yàn)樗鼉?yōu)先飽和了PD1+ T細(xì)胞上的CTLA4，并引起了PD1的快速內(nèi)化和降解。與cadonilimab相比，MGD019和MEDI5752似乎對(duì)雙陽(yáng)性T細(xì)胞顯示出更強(qiáng)的親和力驅(qū)動(dòng)的選擇性增益。雙重失活也在探索中，通過(guò)結(jié)合PD1/PDL1阻斷與LAG3或TIM3抑制。例子是IBI323和FS118，它們都結(jié)合了PDL1和LAG3，并在臨床前模型中顯示出增強(qiáng)的雙重功效。

LY3415244結(jié)合了PDL1和TIM3的阻斷，作為一種不同的免疫調(diào)節(jié)劑，但由于在I期研究中觀察到的免疫原性，該分子的開(kāi)發(fā)被終止。最近，I期劑量遞增和擴(kuò)展數(shù)據(jù)的臨床試驗(yàn)顯示，PD1×LAG3雙特異性抗體tebotelimab在實(shí)體瘤或血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者中作為單藥治療以及與HER2抗體margetuximab聯(lián)合治療時(shí)顯示出有希望的活性。雙配體抑制是另一種基于雙特異性抗體的檢查點(diǎn)抑制方法。PDL1和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGFβ）是具有互補(bǔ)且非冗余免疫抑制活性的受體結(jié)合配體。TGFβ不僅具有免疫抑制作用，還可以進(jìn)一步誘導(dǎo)促血管生成因子的上調(diào)和癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞的激活。目前正在開(kāi)發(fā)幾種靶向PDL1和TGFβ的雙特異性抗體，如類似雙特異性抗體融合蛋白的bintrafusp alfa（M7824）。在這種情況下，PDL1的結(jié)合是通過(guò)一個(gè)“標(biāo)準(zhǔn)”的抗體結(jié)合模塊實(shí)現(xiàn)的，而TGFβ則被人類TGFβ受體II的細(xì)胞外域捕獲。Bintrafusp alfa在臨床前研究中顯示了激活先天和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，從而比單獨(dú)使用抗PDL1抗體或TGFβ陷阱模塊更好地抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，目前正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。Retlirafusp alfa（SHR-1701），另一種以類似方式靶向PDL1和TGFβ的雙功能融合分子，正在對(duì)宮頸癌和胃癌或胃食管結(jié)合部癌癥患者進(jìn)行III期研究（表2）。YM101是一種TGFβ×PDL1雙特異性抗體，目前處于臨床前開(kāi)發(fā)階段。YM101的一個(gè)替代品，Y101D，正在對(duì)晚期實(shí)體瘤患者進(jìn)行評(píng)估（NCT05028556）。所有同時(shí)對(duì)抗抑制性TGFβ和PD1/PDL1途徑的方法在體內(nèi)模型中顯示出比單獨(dú)使用各自結(jié)合物更高的抗腫瘤活性，但迄今為止尚未在臨床上證明概念。針對(duì)性的TGFβ信號(hào)阻斷也已經(jīng)在臨床前研究中通過(guò)阻斷CD4+ T細(xì)胞中的TGFβ信號(hào)的雙特異性抗體實(shí)現(xiàn)。為此，將非免疫抑制性的CD4靶向抗體ibalizumab與TGFβ陷阱以類似于上述的雙特異性抗體方式結(jié)合。這導(dǎo)致在輔助T細(xì)胞中針對(duì)性阻斷TGFβ信號(hào)，可以釋放抗腫瘤反應(yīng)。通過(guò)雙特異性抗體招募磷酸酶抑制PD1是一種最近報(bào)道的新型MoA88。這是通過(guò)一個(gè)單域（Vhh）融合到一個(gè)scFv實(shí)現(xiàn)的，將PD1連接到細(xì)胞表面磷酸酶CD45，這反過(guò)來(lái)觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)去磷酸化。這種方法與單獨(dú)使用PD1抗體介導(dǎo)的配體阻斷相比，增強(qiáng)了檢查點(diǎn)阻斷的抑制。按照同一原則，雙特異性抗體可以將細(xì)胞表面磷酸酶CD45與抑制性自然殺傷細(xì)胞表面受體NKG2A或Ly49連接，以進(jìn)行后續(xù)去磷酸化。這樣的雙特異性抗體可以阻斷并同時(shí)去磷酸化它們的目標(biāo)，可能比相應(yīng)的單特異性抗體及其抑制信號(hào)的組合更有效的拮抗劑，以增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞和T細(xì)胞的抗腫瘤活性。使用雙特異性抗體對(duì)CD73的不同表位進(jìn)行雙位點(diǎn)靶向是另一種雙特異性抗體相關(guān)方法，以抵消免疫抑制活性或增強(qiáng)針對(duì)腫瘤的免疫能力。CD73產(chǎn)生免疫抑制性腺苷，其通過(guò)內(nèi)化的雙特異性抗體介導(dǎo)的抑制和耗盡比單一位點(diǎn)CD73抗體更有效。效應(yīng)細(xì)胞招募劑 T細(xì)胞招募劑在過(guò)去二十年中，專門結(jié)合腫瘤表面抗原和TCR的CD3ε鏈的T細(xì)胞招募劑（TCEs）在這一類雙特異性抗體中占據(jù)主導(dǎo)地位，描述了數(shù)百種TCEs，并且有100多種進(jìn)入臨床開(kāi)發(fā)。

事實(shí)上，第一個(gè)獲準(zhǔn)上市的雙特異性抗體是鼠/大鼠嵌合的上皮細(xì)胞粘附分子（EpCAM）×CD3ε雙特異性抗體catumaxomab，它在2009年被歐洲聯(lián)盟（EU）批準(zhǔn)用于惡性卵巢腹水的腹腔內(nèi)治療，但后來(lái)因商業(yè)原因退出市場(chǎng)。目前正在中國(guó)再次進(jìn)行臨床試驗(yàn)，用于腹腔內(nèi)給藥。系統(tǒng)應(yīng)用的catumaxomab顯示出嚴(yán)重的輸注反應(yīng)和高免疫原性發(fā)生率，可能由于其鼠/大鼠嵌合的恒定區(qū)域和保留的FcγR結(jié)合，導(dǎo)致在沒(méi)有抗原結(jié)合的情況下非特異性FcγR和TCR激活。

隨后，下一代TCEs被設(shè)計(jì)為缺乏Fc部分，如基于串聯(lián)scFv的CD19×CD3ε雙特異性T細(xì)胞招募劑（BiTE）blinatumomab，它在2014年首次被批準(zhǔn)用于治療B細(xì)胞前體急性淋巴細(xì)胞性白血�。˙-ALL）。然而，由于缺乏通過(guò)FcRn的循環(huán)，這種療法需要持續(xù)輸注，F(xiàn)cRn通過(guò)從分揀內(nèi)體循環(huán)到細(xì)胞表面，從內(nèi)溶酶體降解中挽救IgG�；�于blinatumomab的成功，針對(duì)血液和實(shí)體瘤的各種目標(biāo)的BiTEs被開(kāi)發(fā)出來(lái)，但最終沒(méi)有進(jìn)入晚期臨床試驗(yàn)，由于BiTEs和相關(guān)短半衰期的藥代動(dòng)力學(xué)特性不佳。

人們嘗試通過(guò)納入FcγR結(jié)合惰性Fc結(jié)構(gòu)域（沉默F(xiàn)c）或HSA結(jié)合部分來(lái)實(shí)現(xiàn)bsAbs的IgG樣半衰期，目前大多數(shù)處于開(kāi)發(fā)中的TCEs是基于IgG和/或具有IgG樣藥代動(dòng)力學(xué)的。值得注意的是，大多數(shù)TCEs使用單個(gè)單價(jià)結(jié)合位點(diǎn)用于CD3作為T細(xì)胞上的觸發(fā)分子，以避免在沒(méi)有同時(shí)目標(biāo)結(jié)合的情況下TCR交聯(lián)引起的系統(tǒng)性T細(xì)胞激活。然后它們使用一個(gè)（1+1）或兩個(gè)（2+1）腫瘤目標(biāo)的結(jié)合位點(diǎn)，因?yàn)殡p價(jià)結(jié)合可以在腫瘤選擇性和效力方面提供優(yōu)勢(shì)。CD20×CD3ε雙特異性抗體mosunetuzumab106和B細(xì)胞成熟抗原（BCMA）×CD3ε雙特異性抗體teclistamab是第一批異二聚體1+1 IgG基TCEs，分別在2022年被批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)/難治性濾泡性非霍奇金淋巴瘤（NHL）或多發(fā)性骨髓瘤。在2023年，異二聚體2+1 CD20-TCE glofitamab104,108和1+1 CD20-TCE epcoritamab109被批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)/難治性彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL），以及1+1 G蛋白偶聯(lián)受體C類5成員D（GPRC5D）-TCE talquetamab110和BCMA-TCE elranatamab111用于復(fù)發(fā)/難治性多發(fā)性骨髓瘤（表1）。CD20-TCE odronextamab112和BCMA-TCE linvoseltamab的上市申請(qǐng)正在等待監(jiān)管決定。鑒于它們?cè)趶?fù)發(fā)/難治性B細(xì)胞和漿細(xì)胞惡性腫瘤患者中顯示出的有希望的臨床療效和完全緩解率 —— 包括在CAR-T細(xì)胞治療后復(fù)發(fā)的患者中的活性 —— 以及它們作為現(xiàn)成療法的簡(jiǎn)單可用性以及皮下給藥的可能性，可以預(yù)期TCEs將成為CAR-T細(xì)胞療法的主要替代品，特別是隨著它們開(kāi)始被開(kāi)發(fā)用于更早期的治療線并且可以讓患者輕松獲得。免疫動(dòng)員單克隆T細(xì)胞受體針對(duì)癌癥（ImmTACs）是結(jié)合了工程化TCR以識(shí)別人類白細(xì)胞抗原（HLA）呈遞的肽抗原與抗CD3 scFv的TCEs，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)TAAs的靶向。值得注意的是，短暫存在的ImmTAC tebentafusp，它包含一個(gè)針對(duì)由HLA-A*02:01呈遞的黑色素細(xì)胞譜系特異性抗原糖蛋白（gp100）表位的可溶性TCR融合到CD3靶向scFv，已在2022年被批準(zhǔn)用于治療葡萄膜黑色素瘤，為TCEs在實(shí)體瘤中的細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)空間開(kāi)辟了新的領(lǐng)域。

值得注意的是，tebentafusp介導(dǎo)了總體生存益處，盡管它只誘導(dǎo)了少數(shù)臨床反應(yīng)，因此直接殺死腫瘤細(xì)胞可能不是其唯一的MoA。與此同時(shí)，各種基于重組TCR或使用類似TCR的抗體（TCR模擬物）的TCEs已進(jìn)入臨床開(kāi)發(fā)，包括針對(duì)WT1和突變新抗原如KRAS122或p53的TCEs。重要的是，高通量動(dòng)力學(xué)篩選和通用TCR類似庫(kù)可以促進(jìn)高度選擇性的TCR和TCR模擬物的開(kāi)發(fā)，用于TCEs。有趣的是，使用共價(jià)KRASG12C抑制劑sotorasib，可以產(chǎn)生一種類似TCR的TCE，可以特異性識(shí)別HLA呈遞的sotorasib-肽共軛物，并隨后誘導(dǎo)KRASG12C突變細(xì)胞的T細(xì)胞殺傷。細(xì)胞因子釋放綜合征的發(fā)生，主要是由于靶向T細(xì)胞激活，一直是TCEs臨床開(kāi)發(fā)的一個(gè)主要挑戰(zhàn)。盡管在許多情況下，這可以通過(guò)使用類固醇預(yù)處理和逐步劑量增加來(lái)管理，但最近的努力已經(jīng)研究了使用具有降低CD3ε親和力的CD3ε抗體，目標(biāo)是將T細(xì)胞殺傷與細(xì)胞因子分泌解耦。與CAR-T細(xì)胞一樣，由于TCEs的殺傷效力非常高，因此需要嚴(yán)格腫瘤特異性和/或譜系特異性表達(dá)目標(biāo)抗原，以避免靶向非腫瘤毒性。對(duì)于血液癌癥中的B細(xì)胞和漿細(xì)胞抗原，如CD19、CD20、CD79b、BCMA140141和FcRH5，通常認(rèn)為它們只存在于B細(xì)胞和漿細(xì)胞惡性腫瘤以及非必需的B細(xì)胞和漿細(xì)胞譜系中。然而，即使對(duì)于CD19等抗原，其在正常組織中的表達(dá)可能并非絕對(duì)不存在，有報(bào)道稱CD19在圍繞內(nèi)皮細(xì)胞的壁細(xì)胞/血管周細(xì)胞上表達(dá)，這些細(xì)胞對(duì)血腦屏障完整性至關(guān)重要，作為一種靶向非腫瘤機(jī)制與神經(jīng)毒性有關(guān)。

相比之下，在急性髓系白血病中，典型的抗原如CD33或CD123也存在于髓系造血譜系上，使得它們的臨床開(kāi)發(fā)更具挑戰(zhàn)性。類似地，許多主要的（上皮）實(shí)體瘤抗原如EGFR、HER2、EpCAM、腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2（也稱為細(xì)胞表面糖蛋白Trop-2）、MUC1、CEACAM5和glypican 3也可以在（必需的）正常組織中找到。因此，由于更免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境，TCEs（和CAR-T細(xì)胞）在實(shí)體瘤的開(kāi)發(fā)在過(guò)去幾年中進(jìn)展較少。重要的是，必須認(rèn)識(shí)到對(duì)于TCEs，與ADCs150相比，由于更高的效力，對(duì)腫瘤選擇性的要求更嚴(yán)格，固體瘤ADC靶標(biāo)如HER2和TROP-2可能無(wú)法用傳統(tǒng)的TCEs靶向。

與此同時(shí)，與TCEs相比，ADCs可能由于在腫瘤微環(huán)境中釋放有毒載荷而受益于更強(qiáng)的旁觀者殺傷效應(yīng)，對(duì)抗原陰性腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷。因此，很少有腫瘤選擇性抗原似乎是TCEs的可行靶標(biāo)，包括新抗原如p95-HER2和EGFRvIII，或者M(jìn)UC16、claudin 18.2、DLL3和STEAP1等靶標(biāo)。對(duì)于DLL3靶向的TCE tarlatamab，目前正在美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的優(yōu)先審查中，已在小細(xì)胞肺癌中報(bào)告了有希望的I期臨床數(shù)據(jù)，總反應(yīng)率達(dá)到23%。隨后的II期研究證實(shí)了活動(dòng)性，持久的客觀反應(yīng)和有希望的生存結(jié)果，使用每2周10毫克劑量治療的患者�；�于這些數(shù)據(jù)，已啟動(dòng)了一項(xiàng)隨機(jī)關(guān)鍵研究，比較tarlatamab與標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理（NCT05740566）。

同樣，xaluritamig，一種2+1 STEAP1 TCE，具有親和力驅(qū)動(dòng)的活性，能夠選擇性地針對(duì)高表達(dá)STEAP1的腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞相比，已在轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌患者的I期劑量遞增研究中展示了有希望的臨床活性。綜上所述，這些概念驗(yàn)證數(shù)據(jù)表明，TCEs僅限于血液癌癥活躍的共同假設(shè)，特別是B細(xì)胞惡性腫瘤，并不適用，并且TCEs也有可能治療某些實(shí)體瘤，只要能夠管理靶向非腫瘤活性。正在使用多種方法來(lái)克服實(shí)體瘤選擇性挑戰(zhàn)。例如，在雙特異性抗體中使用具有降低親和力的腫瘤抗原結(jié)合物（2+1格式）可以實(shí)現(xiàn)親和力介導(dǎo)的選擇性增益（也稱為親和力調(diào)節(jié)），目標(biāo)是利用腫瘤和正常組織之間的表達(dá)差異，如CEACAM5、HER2和FOLR1，以提高腫瘤選擇性�；蛘�，雙重靶向和親和力介導(dǎo)的選擇性增益應(yīng)用于三特異性TCEs，這些TCEs選擇性地殺死共同表達(dá)這些靶標(biāo)的腫瘤細(xì)胞，但不會(huì)影響只表達(dá)這些靶標(biāo)中一個(gè)的正常細(xì)胞。此外，針對(duì)兩種不同的腫瘤抗原如CD19和CD22的三特異性TCEs可以防止通過(guò)抗原丟失的免疫逃逸。盡管大多數(shù)傳統(tǒng)的TCEs可以招募常規(guī)T細(xì)胞和非傳統(tǒng)先天樣γδ T細(xì)胞（表達(dá)TCRγ/δ而非TCRα/β的T細(xì)胞），但一類特定的γδ TCEs已被設(shè)計(jì)為通過(guò)TCRγδ特別招募γδ T細(xì)胞，目標(biāo)是通過(guò)只針對(duì)可以在患者中進(jìn)一步擴(kuò)展的T細(xì)胞亞群來(lái)提高安全性和有效性。在臨床前研究中，γδ TCEs作為單一藥物顯示出強(qiáng)大的抗腫瘤活性。或者，為了此目的，制造了針對(duì)腫瘤的雙特異性異二聚體BTN2A1和BTN3A1抗體融合蛋白。由于γδ T細(xì)胞生物學(xué)在小鼠模型中沒(méi)有完全反映，這種方法的最終概念驗(yàn)證將不得不依賴于正在進(jìn)行的臨床試驗(yàn)的臨床數(shù)據(jù)，如針對(duì)PSMA的γδ TCE LAVA-1207（NCT05369000）。而不是針對(duì)CD3ε或TCRα/β的雙特異性抗體，肽-MHC復(fù)合物可以被應(yīng)用來(lái)特別招募特定pMHC復(fù)合物的T細(xì)胞，如由于自然發(fā)生和普遍的巨細(xì)胞病毒感染而存在的巨細(xì)胞病毒衍生肽。在另一種方法中，病毒表位可以被傳遞到腫瘤細(xì)胞中，以便加載相應(yīng)的MHC分子，并招募病毒特異性T細(xì)胞攻擊這些細(xì)胞。還描述了用于更有效介導(dǎo)雙特異性抗體介導(dǎo)的聚集和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性的雙特異性抗體。有趣的是，通過(guò)應(yīng)用兩對(duì)獨(dú)立的抗體，可以建立一種邏輯門，通過(guò)補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性選擇性地消除共表達(dá)兩種抗原的細(xì)胞。例如，使用這種方法，可以消除共表達(dá)CD20和CD52的B細(xì)胞，而單獨(dú)表達(dá)這些抗原的細(xì)胞則不會(huì)被殺死。

隨著對(duì)采用CAR-T細(xì)胞療法的極大興趣，一類特定的TCEs，作為CAR-T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間的雙特異性適配器，已被設(shè)計(jì)為特別招募采用轉(zhuǎn)移的T細(xì)胞用于治療各種癌癥，同時(shí)不涉及自然T細(xì)胞。其中一個(gè)例子是合成激動(dòng)性受體（SAR）-T細(xì)胞系統(tǒng)，其中一種雙特異性抗體識(shí)別腫瘤抗原和一個(gè)引入到采用轉(zhuǎn)移的T細(xì)胞中的合成抗原受體。這種在合成生物學(xué)背景下的方法提供了多種方式。進(jìn)一步工程化和控制采用T細(xì)胞療法方法，超出了傳統(tǒng)抗體療法或經(jīng)典CAR-T細(xì)胞療法所能提供的范圍。另一種結(jié)合細(xì)胞療法和雙特異性抗體的方法是體外武裝T細(xì)胞與多種TCEs，目標(biāo)是克服腫瘤異質(zhì)性。為此，T細(xì)胞在體外與針對(duì)腫瘤抗原如GD2、HER2、PSMA和STEAP1的TCEs孵育，并給藥于腫瘤攜帶動(dòng)物，在這些動(dòng)物中，由于抗原丟失，它們阻止了腫瘤進(jìn)展。固有細(xì)胞招募劑 盡管TCEs在效應(yīng)細(xì)胞招募劑領(lǐng)域占據(jù)主導(dǎo)地位，但正在大力開(kāi)發(fā)下一代ICEs，包括NKCEs和雙特異性抗體，這些抗體招募髓系衍生細(xì)胞（MDCs）進(jìn)行吞噬作用，包括中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞。介導(dǎo)ADCC的單克隆抗體，如利妥昔單抗、西妥昔單抗或曲妥珠單抗，因?yàn)锳DCC/抗體依賴性細(xì)胞吞噬作用對(duì)其MoA至關(guān)重要，除了其他作用如信號(hào)抑制外，可以被視為第一代ICEs�；�于這種經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)批準(zhǔn)了幾種與常規(guī)單克隆抗體相比具有增強(qiáng)ADCC功能的Fc工程化IgG1抗體，包括obinutuzumab、mogamulizumab、tafasitamab、margetuximab和amivantamab。

基于這種經(jīng)驗(yàn)和目標(biāo)，進(jìn)一步增強(qiáng)ADCC功能，超越Fc工程化IgG1抗體，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了各種雙特異性NKCEs，它們針對(duì)自然殺傷細(xì)胞上的不同表面分子，如CD16、NKG2D、NKp46或NKp30，作為免疫療法。這些NKCEs中最先進(jìn)的是一種短半衰期的CD30×CD16雙特異性抗體，用于治療霍奇金淋巴瘤，可以作為單一療法、與檢查點(diǎn)抑制聯(lián)合或與自然殺傷細(xì)胞輸注聯(lián)合使用。最近，開(kāi)發(fā)了針對(duì)抗原如EGFR或BCMA的半衰期延長(zhǎng)的四價(jià)IgG基雙特異性抗體，以及利用雙重靶向?qū)崿F(xiàn)腫瘤選擇性的三特異性抗體。對(duì)稱的三特異性NKCEs通過(guò)ADCC特別針對(duì)通過(guò)其CD16結(jié)合區(qū)域共表達(dá)EGFR和PDL1的細(xì)胞，使用兩種合一抗體技術(shù)。另一種激活自然殺傷細(xì)胞的方法依賴于雙特異性融合蛋白，該蛋白由NKG2D配體（例如UL-16結(jié)合蛋白2（ULBP2））與針對(duì)HER2的scFv融合，以實(shí)現(xiàn)有效的ADCC介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷。或者，保留FcγRIII結(jié)合的雙特異性抗體，針對(duì)NKp46或NKp30和各種腫瘤抗原，可以提供強(qiáng)大的抗腫瘤效果。與TCEs不同，其中FcγR結(jié)合是不需要的，這些雙特異性抗體依賴于保留或增強(qiáng)的FcγRIII結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)有效的自然殺傷細(xì)胞參與。值得注意的是，當(dāng)IL-2變體被融合到NKp46雙特異性抗體上，產(chǎn)生四功能分子時(shí)，由于同時(shí)誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞擴(kuò)增，效果大大增強(qiáng)。另一個(gè)積極研究的領(lǐng)域是雙特異性抗體，這些抗體通過(guò)結(jié)合，例如，巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞上的FcαRI受體（CD89）或通過(guò)雙特異性IgE抗體的IgE受體，參與吞噬作用或MDCs以及中性粒細(xì)胞的殺傷�；蛘�，腫瘤靶向雙特異性抗體可以阻斷腫瘤細(xì)胞上基于'不要吃我信號(hào)'的CD47–SIRP1α相互作用，以便這些細(xì)胞被MDCs攻擊和吞噬。雙特異性CD19 x CD47或間皮素x CD47抗體結(jié)合了腫瘤靶向和CD47抑制以及通過(guò)效應(yīng)功能完整的Fc部分招募效應(yīng)細(xì)胞。在這種情況下，對(duì)CD47具有低親和力的雙特異性抗體有利于克服不必要的結(jié)合到紅細(xì)胞上的CD47。各種團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用這一概念進(jìn)行PDL1×CD47共靶向。或者，SIRPα融合蛋白可以用來(lái)阻斷CD47–SIRPα“不要吃我”信號(hào)。共刺激雙特異性抗體 有效、持久且局部限制的抗腫瘤免疫反應(yīng)需要共刺激和共抑制信號(hào)來(lái)緊密調(diào)節(jié)細(xì)胞毒性T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的激活、分化和維持。TNFRSF家族成員（如4-1BB、CD40、OX40、TNFRSF18（也稱為糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNFR相關(guān)蛋白（GITR））、CD27或CD30）以及CD28免疫球蛋白超家族（如CD28、CTLA4、PD1、誘導(dǎo)性T細(xì)胞共刺激因子（ICOS）和B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞衰減因子（BTLA））及其相應(yīng)的配體，在通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞接觸（如抗原呈遞細(xì)胞（APCs）和T細(xì)胞之間）提供的局部免疫調(diào)節(jié)信號(hào)中發(fā)揮著顯著作用。這些受體為T細(xì)胞提供了所謂的信號(hào)2，這對(duì)于維持TCR通過(guò)肽-MHC-TCR相互作用或通過(guò)TCE交聯(lián)TCR所提供的信號(hào)1是必需的。針對(duì)這些免疫調(diào)節(jié)途徑的靶向可能增強(qiáng)免疫療法。研究表明，針對(duì)共刺激受體的激動(dòng)性單克隆抗體通常只會(huì)導(dǎo)致微弱的激活，但這種激活可以通過(guò)FcγR介導(dǎo)的受體超聚集顯著增加。此外，抗體與受體之間的化學(xué)計(jì)量比、結(jié)合親和力和表位特異性等因素可以影響共刺激抗體的活性。因此，降低免疫調(diào)節(jié)抗體的親和力可以作為一種策略，通過(guò)增加受體聚集來(lái)增強(qiáng)激動(dòng)性活性，這一原則經(jīng)常應(yīng)用于雙特異性抗體激動(dòng)劑（見(jiàn)上文）。然而，由于增加的趨化因子和細(xì)胞因子產(chǎn)生導(dǎo)致的免疫相關(guān)系統(tǒng)性不良事件是共刺激抗體藥物開(kāi)發(fā)的限制因素�？贵w-細(xì)胞因子融合蛋白和雙特異性抗體能夠以目標(biāo)依賴的方式提供共刺激信號(hào)，通過(guò)雙重靶向兩種不同的共刺激受體或通過(guò)靶向共刺激受體和CPI來(lái)規(guī)避這一限制。腫瘤靶向共刺激雙特異性抗體 用一個(gè)臂結(jié)合到TAA上，另一個(gè)臂結(jié)合到免疫細(xì)胞上的共刺激受體上的雙特異性抗體，可以通過(guò)在癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞之間跨作用來(lái)局部介導(dǎo)受體聚集，從而提供信號(hào)2。目前正在臨床試驗(yàn)中的共刺激雙特異性抗體包括針對(duì)4-1BB、CD40和CD28的分子。T細(xì)胞激活后誘導(dǎo)表達(dá)的4-1BB使其成為增強(qiáng)CD8 T細(xì)胞反應(yīng)的T細(xì)胞共刺激的有吸引力的靶標(biāo)。使用針對(duì)4-1BB的激動(dòng)性抗體（如urelumab和utomilumab）作為單一療法在臨床試驗(yàn)中的安全性問(wèn)題和較差的療效，使人們重新將努力集中在可以克服這些毒性的雙特異性抗體上，通過(guò)引入腫瘤特異性共刺激。大約一半的癌癥靶向共刺激雙特異性抗體在臨床試驗(yàn)中通過(guò)4-1BB發(fā)揮作用。先進(jìn)的雙特異性抗體包括PRS-343（cinrebafusp），一種針對(duì)HER2和4-1BB的四價(jià)雙特異性抗體-抗鈣蛋白融合蛋白，在IND使能研究中被發(fā)現(xiàn)耐受性良好，沒(méi)有明顯和相關(guān)藥物相關(guān)毒性；FAP-4-1BBL（RG7872），作為單一療法和與PDL1抑制聯(lián)合使用時(shí)顯示出藥理活性；或englumafusp alfa，正在研究中作為與glofitamab聯(lián)合用于DLBCL的信號(hào)2提供者。其他在臨床試驗(yàn)中通過(guò)4-1BB進(jìn)行腫瘤選擇性共刺激的雙特異性抗體目標(biāo)包括EGFR、PSMA、CLDN18.2、B7H4、CEACAM5、HER2、PDL1（見(jiàn)下文）和FAP48。此外，使用CD28作為共刺激受體的雙特異性抗體，目前在臨床試驗(yàn)中。通過(guò)與APC上的CD80（也稱為B7.1）或CD86（也稱為B7.2）的結(jié)合，CD28為幼稚T細(xì)胞提供了必要的二次信號(hào)，以實(shí)現(xiàn)完全的T細(xì)胞激活和存活。這種信號(hào)也可以通過(guò)激動(dòng)性CD28抗體提供，即使在沒(méi)有初級(jí)TCR參與的情況下，如超激動(dòng)劑TGN1412所示，它在I期研究中因大量細(xì)胞因子釋放綜合征而顯著失敗。后來(lái)發(fā)現(xiàn)，TGN1412特別在低劑量下作用于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞），而在高劑量下激活傳統(tǒng)T細(xì)胞和Treg細(xì)胞，為選擇性靶向T細(xì)胞亞群提供了窗口，但也突出了T細(xì)胞共刺激與超激活之間的微妙平衡。一些雙特異性抗體可以以目標(biāo)依賴的方式提供這種二次共刺激信號(hào)，以增強(qiáng)腫瘤限制性的抗腫瘤T細(xì)胞反應(yīng)。值得注意的是，雙特異性抗體可以被設(shè)計(jì)為單獨(dú)使用時(shí)活性有限且無(wú)毒性，但可以增強(qiáng)T細(xì)胞激活和TCEs的抗腫瘤活性。REGN5837是一種針對(duì)CD22和CD28的雙特異性抗體，已進(jìn)入與針對(duì)CD20的TCE odronextamab聯(lián)合用于NHL治療的I期試驗(yàn)。腫瘤靶向CD28雙特異性抗體也可以與PD1協(xié)同作用，提供長(zhǎng)期抗腫瘤免疫反應(yīng)，目前，多個(gè)針對(duì)TAAs如EGFR、MUC16、PSMA、B7-H3、CD19、CD22或PDL1的雙特異性抗體正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，與檢查點(diǎn)抑制聯(lián)合使用或作為單一療法。MDCs和樹(shù)突細(xì)胞激活雙特異性抗體 CD40在包括APCs、其他MDCs和B細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞類型中表達(dá)，但也在廣泛的惡性細(xì)胞上表達(dá)。單克隆激動(dòng)性CD40抗體可以通過(guò)誘導(dǎo)APCs成熟和激活抗原特異性T細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞來(lái)觸發(fā)抗腫瘤效應(yīng)，從而促進(jìn)腫瘤特異性免疫反應(yīng)，特別是通過(guò)啟動(dòng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞。除了具有劑量限制毒性的激動(dòng)性CD40抗體外，還開(kāi)發(fā)了針對(duì)CD40和各種TAAs如CEACAM5、EpCAM或間皮素的雙特異性抗體。與其他TNF超家族成員一樣，受體聚集在受體激活中起著關(guān)鍵作用。將CD40激動(dòng)性抗體與針對(duì)腫瘤靶向抗原的抗體結(jié)合在雙特異性抗體中，允許共刺激活性定向到TME，從而提高安全性和有效性。例如，針對(duì)CD40和CEACAM5或EpCAM的四價(jià)雙特異性抗體的概念驗(yàn)證表明，與單一CD40抗體相比，它們?cè)鰪?qiáng)了T細(xì)胞交叉啟動(dòng)。針對(duì)間皮素和CD40的雙特異性抗體（ABBV-428）在體外和體外模型中展示了增強(qiáng)的APC和T細(xì)胞激活，并且在I期試驗(yàn)中顯示出可接受的安全性概況。為了在腫瘤內(nèi)而不是外周選擇性激活CD40，生成了FAP×CD40，一種包含兩個(gè)CD40結(jié)合位點(diǎn)和一個(gè)FAP結(jié)合位點(diǎn)的雙特異性抗體。該抗體提供了一個(gè)強(qiáng)烈的FAP依賴性CD40刺激信號(hào)，展示了良好的安全性概況以及腫瘤積聚和腫瘤內(nèi)免疫激活，目前正在進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)。MP-0317是一種多功能設(shè)計(jì)ankyrin重復(fù)蛋白（DARPin），應(yīng)用相同的概念，針對(duì)FAP、CD40和HSA進(jìn)行半衰期延長(zhǎng)，目前正在進(jìn)行I期臨床研究�；蛘�，雙特異性抗體可以通過(guò)Clec12a標(biāo)記物直接靶向樹(shù)突細(xì)胞。雙特異性抗體的雙重共刺激 在免疫細(xì)胞上雙重靶向兩種不同的共刺激受體已被用于誘導(dǎo)強(qiáng)大的抗腫瘤反應(yīng)。FS120是一種針對(duì)活化T細(xì)胞上表達(dá)的4-1BB和OX40的四價(jià)雙特異性抗體，以一種不依賴FcγR的方式激活CD4和CD8 T細(xì)胞。這種活性需要兩個(gè)受體的共刺激才能有效激活免疫細(xì)胞并發(fā)揮抗腫瘤活性，支持使用四價(jià)雙特異性抗體雙重靶向共刺激受體以誘導(dǎo)有效的受體聚集和激活的概念。在動(dòng)物研究中，F(xiàn)S120的替代品沒(méi)有引起肝臟炎癥和肝毒性，這是激動(dòng)性4-1BB抗體觀察到的限制。FS120目前正在進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)。類似的方法中，開(kāi)發(fā)了一種雙價(jià)雙特異性抗體，用于雙重靶向4-1BB和CD40（BNT-312，tecaginlimab），因此靶向T細(xì)胞和APCs。APCs的CD40激活導(dǎo)致共刺激分子的上調(diào)和免疫刺激性細(xì)胞因子的分泌，從而在不依賴CD4 T細(xì)胞幫助的情況下，實(shí)現(xiàn)強(qiáng)大的CD8 T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。雙特異性抗體用于雙重檢查點(diǎn)抑制和共刺激 抗共刺激受體的抗體還被與CPIs結(jié)合使用，以釋放T細(xì)胞免受抑制信號(hào)的影響，同時(shí)增強(qiáng)T細(xì)胞反應(yīng)，特別是在對(duì)檢查點(diǎn)抑制有抵抗力或難治性的腫瘤中。大多數(shù)目前正在臨床試驗(yàn)中的雙特異性抗體使用跨作用的方式結(jié)合這些信號(hào)，通過(guò)靶向腫瘤細(xì)胞上的PDL1和免疫細(xì)胞上的共刺激受體，其中4-1BB是最突出的靶標(biāo)。超過(guò)十種不同的針對(duì)PDL1和4-1BB的雙特異性抗體正在進(jìn)行I期或II期試驗(yàn)。II期候選物包括一種IgG-anticalin融合蛋白（PRS-344），其中配體結(jié)合anticalin框架代表第二特異性，一種雙價(jià)雙特異性IgG抗體（acasunlimab，也稱為GEN1046）和一種三價(jià)，三特異性單鏈二抗體-scFv融合蛋白，進(jìn)一步包含一個(gè)HSA結(jié)合位點(diǎn)以延長(zhǎng)半衰期（NM21-1480）。這些類型的雙特異性抗體可以增強(qiáng)免疫反應(yīng)，超越單一抗體及其組合，進(jìn)一步提供針對(duì)PDL1表達(dá)腫瘤細(xì)胞的靶向共刺激，以及TME中的MDCs和腫瘤引流淋巴結(jié)。與此一致，TME中表達(dá)4-1BB的腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8 T細(xì)胞亞群表達(dá)高水平的PD1，因此容易受到PDL1×4-1BB雙特異性抗體的治療。值得注意的是，由于4-1BB信號(hào)需要超聚集，與PDL1的結(jié)合可以導(dǎo)致TME中條件聚集和激活的4-1BB，減少肝臟毒性，如四價(jià)雙特異性IgG-scFv（ABL503）所示。遵循這一概念的進(jìn)一步雙特異性抗體包括四價(jià)雙特異性單克隆抗體（FS222）和雙價(jià)雙特異性IgGs，如MCLA-145。同樣，CD28共刺激和檢查點(diǎn)抑制可以通過(guò)在腫瘤內(nèi)順式作用的T細(xì)胞雙重靶向進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。ATOR-1015的可行性已得到證明，它是一種針對(duì)OX40的IgG，融合到針對(duì)CTLA4的優(yōu)化版本的V型域的CD86上。與4-1BB類似，CTLA4和OX40在活化的T細(xì)胞上上調(diào)，并由Treg細(xì)胞表達(dá)，特別是在TME中。與GITR和ICOS不同，CD27由naive T細(xì)胞表達(dá)，因此有助于促進(jìn)新的T細(xì)胞反應(yīng)。PDL1×CD27雙特異性抗體在臨床前研究中比PD1阻斷和CD27共刺激的組合更有效，同時(shí)展現(xiàn)出良好的安全性概況。在概念上類似的方法中，PD1的結(jié)合位點(diǎn)與其他TNF超家族的共刺激成員結(jié)合，包括4-1BB（如與IBI319結(jié)合）、GITR和ICOS（XmAb23104）。GITR也在活化的T細(xì)胞上上調(diào)，并由Treg細(xì)胞恒定表達(dá)，在其中發(fā)揮著增強(qiáng)初始免疫反應(yīng)的關(guān)鍵作用。

PD1×GITR-L雙特異性融合蛋白的概念驗(yàn)證已經(jīng)展示。對(duì)于這些藥物中的一些，與聯(lián)合或分別協(xié)同效應(yīng)相比，檢查點(diǎn)抑制的相對(duì)貢獻(xiàn)并不一定確立。新興概念 支持雙特異性抗體開(kāi)發(fā)的概念從早期探索性方法迅速發(fā)展到臨床開(kāi)發(fā)，雙特異性抗體現(xiàn)在已確立為治療原則。然而，雙特異性抗體領(lǐng)域仍在不斷進(jìn)展，以進(jìn)一步探索和擴(kuò)展技術(shù)和應(yīng)用。學(xué)術(shù)界以及生物技術(shù)和制藥工業(yè)追求的各種早期探索性雙特異性抗體方法是有希望的，其中一部分可能提供尚未由當(dāng)前開(kāi)發(fā)中的雙特異性抗體解決的治療概念。本綜述的范圍不允許我們涵蓋所有或許多這樣的早期方法，實(shí)際上在這個(gè)快速增長(zhǎng)的領(lǐng)域中可能無(wú)法全面覆蓋。因此，我們通過(guò)提及一些我們認(rèn)為相關(guān)并有潛力進(jìn)一步推動(dòng)基于雙特異性抗體的癌癥治療界限的新興主題來(lái)結(jié)束我們的綜述。三特異性TCEs與集成共刺激 共刺激信號(hào)可以與雙特異性TCEs結(jié)合，以促進(jìn)有效的T細(xì)胞激活。這已經(jīng)通過(guò)上述的雙特異性TCEs和共刺激雙特異性抗體的組合實(shí)現(xiàn)，但也通過(guò)在雙特異性TCE中包含第三個(gè)結(jié)合位點(diǎn)來(lái)針對(duì)共刺激受體，從而生成三特異性抗體。目前有兩種這樣的三特異性TCE正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，它們針對(duì)TAA和CD3，并進(jìn)一步包含一個(gè)針對(duì)CD28的結(jié)合位點(diǎn)。SAR443216是一種三價(jià)三特異性免疫球蛋白基抗體，針對(duì)HER2×CD3×CD28，包含一個(gè)突變的IgG4，缺乏Fc介導(dǎo)的效應(yīng)功能。這種三特異性抗體目前正在I期臨床試驗(yàn)中，能夠激活初級(jí)CD4和CD8 T細(xì)胞，誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，釋放細(xì)胞因子和顆粒酶B以及T細(xì)胞介導(dǎo)的HER2表達(dá)腫瘤細(xì)胞的殺傷，包括HER2表達(dá)低的細(xì)胞。類似地，一種針對(duì)在多發(fā)性骨髓瘤中過(guò)度表達(dá)的CD38的結(jié)合位點(diǎn)與CD3和CD28結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合在三特異性抗體SAR442257中，目前也在I期臨床試驗(yàn)中。前藥方法 一種新興的方法旨在通過(guò)提供“安全關(guān)鍵”的特異性作為前藥，在腫瘤處選擇性激活，從而生成具有高度腫瘤特異性功能的雙特異性抗體。一些應(yīng)用于失活抗體以生成前藥并在腫瘤處重新激活的概念如圖4所示。前藥轉(zhuǎn)化為功能性雙特異性抗體可以通過(guò)腫瘤微環(huán)境中存在的腫瘤特異性蛋白酶等環(huán)境觸發(fā)因素來(lái)實(shí)現(xiàn)。例如，具有空間屏蔽的雙特異性抗體可以通過(guò)蛋白酶激活。需要腫瘤特異性蛋白酶表達(dá)的蛋白酶激活TCEs，即所謂的probodies，需要腫瘤特異性蛋白酶在TME中的表達(dá)才能激活。另一種早期階段的雙重腫瘤靶向方法依賴于從兩個(gè)具有分裂CD3ε結(jié)合基團(tuán)的雙特異性抗體中腫瘤特異性組裝功能性CD3ε抗體片段。這些實(shí)體需要被設(shè)計(jì)為在循環(huán)中作為單獨(dú)實(shí)體時(shí)不活躍，以便它們只在腫瘤抗原結(jié)合和隨后的原位組裝后被激活，如已經(jīng)為半抗體或前藥激活鏈交換（PACE）分子所描述的那樣。這類分子面臨的主要挑戰(zhàn)仍然是以單體形式大規(guī)模生產(chǎn)它們，并防止在沒(méi)有目標(biāo)結(jié)合的情況下過(guò)早組裝。通過(guò)目標(biāo)鏈交換介導(dǎo)的分裂型I細(xì)胞因子的重建就是一個(gè)例子，說(shuō)明如何實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性組裝。值得注意的是，最近開(kāi)發(fā)了一種引入到抗4-1BB抗體結(jié)合位點(diǎn)的ATP依賴性開(kāi)關(guān)，以增加腫瘤選擇性并避免靶上、靶外毒性。這種開(kāi)關(guān)使用腫瘤中升高的ATP水平作為觸發(fā)因素，可能也適用于其他結(jié)合實(shí)體。

圖4 | 雙特異性抗體領(lǐng)域的新興概念。

a, 帶有集成共刺激的三特異性T細(xì)胞招募劑（TCEs），用于通過(guò)CD3結(jié)合同時(shí)激活T細(xì)胞受體（TCR）（信號(hào)1）和通過(guò)結(jié)合CD28進(jìn)行共刺激（信號(hào)2）。
b, 雙特異性抗體（bsAb）前藥的作用方式。用于生成前藥并重新激活所需作用位點(diǎn)的抗體的一般概念包括：阻斷結(jié)合位點(diǎn)以使抗體失活，以及通過(guò)蛋白酶誘導(dǎo)激活被阻斷的抗原結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)目標(biāo)環(huán)境（如酸性pH或ATP）的親和性調(diào)節(jié)，以及由于通過(guò)高濃度局部富集互補(bǔ)前藥而進(jìn)行的組裝或交換反應(yīng)。
c, 通過(guò)結(jié)合表面抗原（腫瘤相關(guān)抗原（TAA））和降解分子，例如膜E3連接酶，實(shí)現(xiàn)蛋白酶體靶向嵌合體（PROTAC）方法，這導(dǎo)致細(xì)胞表面目標(biāo)的內(nèi)化和蛋白酶體降解。
d, 例如通過(guò)基因療法將bsAb傳遞到CAR-T細(xì)胞中。
e, 細(xì)胞因子模擬bsAb觸發(fā)細(xì)胞因子受體途徑，如通過(guò)將受體域引入立體接近性，模仿細(xì)胞因子作用的IL-2Rβ–IL-2Rγ異二聚體。PROTAC雙特異性抗體 另一個(gè)新興概念和新的作用機(jī)制最近被描述，它使用雙特異性抗體通過(guò)靶向降解來(lái)滅活與增殖相關(guān)的過(guò)程。
類似于新興的雙特異性或多特異性小分子蛋白水解靶向嵌合體（PROTACs）領(lǐng)域，雙特異性抗體可以被設(shè)計(jì)為觸發(fā)內(nèi)部化并隨后降解參與癌癥發(fā)展和/或進(jìn)展的表面蛋白。這樣的雙特異性抗體同時(shí)結(jié)合到被靶向降解的蛋白質(zhì)，以及觸發(fā)結(jié)合目標(biāo)蛋白的內(nèi)部化和隨后降解的因素，如膜可及的E3泛素連接酶或轉(zhuǎn)鐵蛋白受體。目前還沒(méi)有已知的抗體-PROTAC概念進(jìn)入臨床研究，但這類實(shí)體的開(kāi)發(fā)與“標(biāo)準(zhǔn)”雙特異性抗體的開(kāi)發(fā)完全兼容，并為靶向新途徑并盡快將其概念帶入臨床提供了獨(dú)特的可能性。

雙特異性抗體的傳遞 
雙特異性抗體發(fā)展的另一個(gè)重要新興概念是局部生產(chǎn)和隨后的局部傳遞雙特異性抗體，例如通過(guò)脂質(zhì)納米粒子介導(dǎo)的mRNA傳遞CLADN6 TCE，溶瘤病毒或類似基因療法的方法，包括CAR-T細(xì)胞。細(xì)胞因子模擬抗體 最后，雙特異性抗體也可以作為細(xì)胞因子模擬物或所謂的合成細(xì)胞因子激動(dòng)劑。在這種情況下，已經(jīng)描述了scFvs或基于單一結(jié)構(gòu)域Vhh的方法，通過(guò)模仿IL-2或IL-15、IL-18、I型干擾素和IL-10有效地觸發(fā)細(xì)胞因子信號(hào)�；蛘�，可以通過(guò)使用分裂方法使用新設(shè)計(jì)的IL-2模擬蛋白neoleukin實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性細(xì)胞因子受體激動(dòng)活性。這種基于抗體的細(xì)胞因子模擬物在癌癥免疫療法中可能有各種應(yīng)用。

展望 
雙特異性抗體領(lǐng)域近年來(lái)取得了顯著進(jìn)展，到2023年底，已有十多種雙特異性抗體獲得批準(zhǔn)，許多不同的方法正在臨床測(cè)試中。然而，我們認(rèn)為，由于癌癥的異質(zhì)性和適應(yīng)性，這些方法中不太可能有一種成為通用的癌癥免疫療法。相反，抗體將需要為特定應(yīng)用量身定制，并將依賴于與其他方法的結(jié)合，以最大化它們的療效和安全窗口。具有多重特異性的抗體治療的發(fā)展增長(zhǎng)可能會(huì)在未來(lái)幾個(gè)領(lǐng)域發(fā)生：針對(duì)具有明確依賴性的腫瘤的腫瘤相關(guān)RTKs的雙特異性抗體；用于以增加的選擇性靶向腫瘤的雙特異性ADCs；用于靶向降解適用于各種途徑的細(xì)胞表面蛋白的雙特異性PROTACs；以及用于癌癥免疫療法的多特異性抗體。在后一個(gè)領(lǐng)域，特別是對(duì)于非常有效的基于T細(xì)胞的療法，如TCEs或CAR-T細(xì)胞，識(shí)別高度腫瘤選擇性抗原將是至關(guān)重要的，將需要能夠通過(guò)腫瘤特異性蛋白酶激活和更好地調(diào)節(jié)效應(yīng)功能來(lái)特別實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性活性，同時(shí)保護(hù)正常組織。

另一個(gè)重要方面是提供雙重檢查點(diǎn)抑制和/或補(bǔ)充共刺激信號(hào)給T細(xì)胞，以維持和延長(zhǎng)T細(xì)胞反應(yīng)，如已被證明對(duì)CAR-T細(xì)胞療法的臨床成功至關(guān)重要。重要的是，這種方法不僅適用于與TCEs的組合，也適用于與內(nèi)源性免疫方法的組合。另一個(gè)重要方面是通過(guò)激活先天免疫系統(tǒng)，包括自然殺傷細(xì)胞、MDCs和樹(shù)突細(xì)胞，促進(jìn)二次免疫反應(yīng)的產(chǎn)生。與其他癌癥藥物一樣，通過(guò)改進(jìn)的診斷方法和新的發(fā)展范式，使雙特異性抗體和多特異性基于抗體的治療能夠在疾病早期應(yīng)用于患者將是實(shí)現(xiàn)治愈癌癥患者目標(biāo)的關(guān)鍵。