免疫熒光技術(shù)簡介

免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術(shù)，根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，將熒光素偶聯(lián)到已知的抗原或抗體上制成熒光探針，與血清或體液、細(xì)胞、組織中存在的相應(yīng)抗體（或抗原）結(jié)合，從而對這些組織中存在的抗原或抗體進(jìn)行定性、定量和（或）定位的檢測。

用于熒光標(biāo)記的抗體，應(yīng)遵循以下幾個原則：特異性強(qiáng)、高純度、效價滿意（>1:20），最好采用單克隆抗體。

用于抗體標(biāo)記的熒光素需要具備以下條件：能夠與蛋白質(zhì)形成穩(wěn)定的共價鍵；標(biāo)記后不影響蛋白質(zhì)和自身的生物學(xué)活性；熒光效率高，標(biāo)記后熒光強(qiáng)度下降不明顯；熒光色澤與背景色澤對比鮮明；標(biāo)記方法簡單、快速；安全無毒。

熒光抗體的保存原則是：防止抗體失活；保持熒光素不脫落和不淬滅。

免疫熒光技術(shù)的染色方法分為直接法和間接法。直接法的原理是將熒光標(biāo)記的抗原/抗體直接與相應(yīng)抗體/抗原反應(yīng)，多用于流式細(xì)胞儀分析。直接法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便、特異性高，非特異性熒光染料少。但直接法的靈敏度偏低，而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體，若檢測多種抗原需制備多種相應(yīng)的熒光標(biāo)記抗體。間接法的原理是先用未標(biāo)記的抗體進(jìn)行標(biāo)記，使抗原抗體充分結(jié)合，然后洗滌，除去未結(jié)合的抗體；然后加上熒光標(biāo)記的二抗，使之與已經(jīng)結(jié)合在抗原上的一抗結(jié)合。