Western樣品制備方法簡(jiǎn)介

瀏覽次數(shù)：1124　發(fā)布日期：2015-5-4　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

一、細(xì)胞抗原和組織抗原樣品的制備

1、細(xì)胞抗原的處理方法
向收集到的細(xì)胞中加入RIPA裂解緩沖液（蛋白酶抑制劑在使用前加入，終濃度為2ug/ml）在冰上裂解30-60min，然后再插入冰盒進(jìn)行超聲，超聲強(qiáng)度以不產(chǎn)生泡沫為宜，超聲每次2-3s，重復(fù)3或4次，12000g離心3-5min，吸取上清備用。

2、組織抗原的處理方法
將組織從動(dòng)物體內(nèi)取出（樣品不宜反復(fù)凍融），取少量（1-2g）放入玻璃勻漿器中研磨成勻漿，然后轉(zhuǎn)入微量離心管中進(jìn)行超聲，超聲強(qiáng)度以不產(chǎn)生泡沫為準(zhǔn)，超聲每次5-7s，重復(fù)5或6次，再12000r/min，離心3-5min，吸取上清備用。
上述兩種方法得來(lái)的樣品處理液還要加入1/4體積左右的電泳上樣緩沖液，然后放在沸水浴中加熱3-4min使蛋白質(zhì)變性，方可作為樣品準(zhǔn)備行凝膠電泳。

二、其他樣品的制備

細(xì)菌抗原、分泌上清樣品、經(jīng)抽提純化的蛋白質(zhì)樣品可以直接加入電泳上樣緩沖液，然后在沸水浴中加熱3-4min使蛋白質(zhì)變性。

Western樣品制備必備品

廠商	目錄號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	目錄價(jià)
Liankebio	LK-WB018	PMSF (100mM)	1 g	60
Liankebio	LK-WB019	RIPA裂解液	100ml	150
Liankebio	LK-WB004	SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)	1 ml*2	30

閱讀原文：

來(lái)源：杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司
聯(lián)系電話：4006721600
E-mail：network@liankebio.com

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