UniGel高載量離子交換介質(zhì)的特點和應用

UniGel：高載量離子交換層析的新選擇

   UniGel 高載量離子交換介質(zhì)采用區(qū)別于傳統(tǒng)離子交換層析基質(zhì)的表面修飾技術，運用特殊的延長臂和鍵合技術，使其載量獲得極大提升。離子交換（IEX）是根據(jù)生物分子表面電荷（種類、數(shù)目和分布）差異實現(xiàn)對不同生物分子的分離的方法。常規(guī)的離子交換層析介質(zhì)是通過直接在介質(zhì)表面鍵合離子交換基團的方法來發(fā)揮作用，導致載量較小。UniGel 高載量離子交換介質(zhì)采用區(qū)別于傳統(tǒng)離子交換層析基質(zhì)的表面修飾技術，運用特殊的延長臂和鍵合技術，使其載量獲得極大提升。

UniGel-30DEAE

單分散聚丙烯酸酯電鏡圖片

UniGel高載量離子交換介質(zhì)的特點

超高動態(tài)結合載量

提供30μm和80μm兩種粒徑，提供從中度純化到精細純化的分辨率選擇

填料裝柱壓縮系數(shù)更�。�=1.05），遠低于瓊脂糖和葡聚糖凝膠

設計更靈活，允許更高流速和床高度，易于優(yōu)化放大

更優(yōu)越的耐堿性，允許更多次地再生和延長使用壽命

更高的生產(chǎn)效率和更低的成本，提升企業(yè)收益

應用范圍

  UniGel系列高載量離子交換填料主要應用于抗體、蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子的高載量捕獲和大規(guī)模純化。尤其是標簽蛋白的三步純化、抗體三步純化。

表UniGel產(chǎn)品基本屬性特征

化學穩(wěn)定性測試 Stability Test

（一般根據(jù)不同產(chǎn)品使用環(huán)境來設計）

Uni系列化學穩(wěn)定性測試結果

層析柱或預裝柱介紹

裝柱流程或方法

裝柱方法

1) 首先計算所裝色譜柱的柱體積 Vc， Vc=Ac × L， Ac=π × r2。

* Vc：色譜柱柱體積；Ac：色譜柱橫截面積；L:色譜柱高度；r：色譜柱半徑。

2) 在原容器中輕輕攪動離子交換層析介質(zhì)，使其完全分散在液體中形成勻漿液。量取所需原液的質(zhì)量或體積*。

* 一般情況下， 離子交換層析介質(zhì)在壓力作用下都會被壓緊導致體積收縮，為了獲得緊密的柱床，推薦介質(zhì)的體積過量一些，一般為柱體積的 1.2 倍左右。

3） 傾出介質(zhì)中 20%乙醇保存液， 用 0.5 M NaCl 溶液置換 20%乙醇， 平衡過夜。

4） 裝柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 65 ~ 70%；將勻漿一次性倒入層析柱，沉降平衡后標注高度。

5） 將分配器裝入，調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10；然后啟動輸液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定（-2 柱體積）。

6） 按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定，須達到預定標準。

柱效測定

  裝好的色譜柱應使用 2 BV 0.5 M NaCl 溶液平衡，再用 2.0 M NaCl 以 100 cm/h 流速進行柱效測試， 具體測試參數(shù)詳見下表：

存儲條件

  暫時不使用的層析介質(zhì)需保存在 4～35 ℃ 的 20%乙醇中，并蓋緊瓶蓋，已經(jīng)裝好層析柱應保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0)中。

清洗方法

  為了保持層析柱的性能，若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過程中未能有效去除，可執(zhí)行在位清洗步驟，在位清洗時，也可采用反向沖洗的方法，具體操作步驟如下：
（1）對于通過離子鍵結合過強的蛋白，可用 3 BV 以上的 2 M NaCl 清洗，并用 3 BV 以上的去離子水清洗；
（2）對沉淀蛋白、以疏水性結合的蛋白或脂蛋白，可用 0.2~0.5 M NaOH 清洗（與層析介質(zhì)接觸時間 1~2 小時），并用 5 BV 以上平衡液和 3 BV 以上的去離子水清洗；
（3）對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類物質(zhì)，可用 5 BV 以上的 50%乙醇或 30%異丙醇清洗（與層析介質(zhì)接觸時間 0.5-1 小時），并用 5 BV 以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗，如用 0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M 乙酸清洗 1-2 小時，并用 5 BV 以上的 50%乙醇沖洗去除去污劑，然后用 5 BV 以上的純水沖洗（使用高濃度的有機溶劑時，為了避免產(chǎn)生氣泡，應采用逐步增加有機溶劑濃度的方法）。

再生方法

每次層析之后可用 0.5-2 M NaCl 清洗層析柱，除去強結合于層析介質(zhì)上的蛋白。

UniGel系列載量測試

UniGel系列產(chǎn)品的優(yōu)勢就是高載量高流速，通過對比同類產(chǎn)品，我們可以更直觀了解UniGel系列的載量優(yōu)勢。

1.UniGel與傳統(tǒng)離子交換介質(zhì)

動態(tài)載量的對比

以BSA (2 mg/mL) in 25 mM Tris HCl (pH 7.4)為樣品，180cm/h的流速進行測試，黑色線條表示UniGel-80DEAE的動態(tài)載量，紅色表示傳統(tǒng)離子交換填料的動態(tài)載量，可以看出可以看出UniGel-80DEAE載量明顯比傳統(tǒng)填料的載量高。

2.UniGel-80DEAE與相應的國際知名品牌的溶菌酶動態(tài)吸附載量對比

UniGel系列的載量并不只是比傳統(tǒng)離子交換填料高，還比別的品牌同類型的產(chǎn)品高。

UniGel-80DEAE和國際知名品牌同類型填料載量對比

3.在不同流速下，UniGel系列產(chǎn)品依然保持著較高的載量

UniGel-80DEAE在不同流速下的載量

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