土壤微生物接種實(shí)驗(yàn)流程

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相關(guān)知識點(diǎn)
    接種方法：常用的有斜面接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養(yǎng)基的穿刺接種法。
    接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等。
實(shí)驗(yàn)原理
      土壤是微生物生活的大本營，為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)該微生物對營養(yǎng)、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各種方法分離、純化該微生物，直至得到純菌株。
儀器設(shè)備
   樣品：新鮮土壤。
   其它：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、無菌三角玻棒、電子天平、記號筆、接種環(huán)、酒精燈、火柴。
   試劑：1萬U/mL鏈霉素液、10％苯酚
   培養(yǎng)基：滅菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏一號培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。
   無菌水：帶有玻璃珠裝有45mL無菌水三角瓶、裝有9mL無菌水的試管。
實(shí)驗(yàn)步驟
    （一）實(shí)驗(yàn)程序1
 制備土壤稀釋液：
 1、稱取土壤5g，放入45mL無菌水的三角瓶中，振蕩10min，即為稀釋10－1的土壤懸液。
 2、 另取裝有9mL無菌水試管5支，用記號筆編上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀釋成10－1的土壤液，振蕩后靜止0.5min，用無菌吸管吸取1mL土壤懸液加入10－2的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10－2土壤稀釋液。同法依次連續(xù)稀釋至10－4、10－5 、10－6土壤稀釋液。
    吸取稀釋液
    取一吸管，以無菌操作法分別吸取10－4、10－5、 10－6土壤稀釋液0.1mL，加在已制好的平板培養(yǎng)基上。
    涂板
    用玻璃刮鏟將稀釋液在培養(yǎng)機(jī)上充分混勻鋪平，倒置于恒溫箱培養(yǎng)。
    計算出每克土壤中細(xì)菌的數(shù)量。
    即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液的稀釋倍數(shù)即得。
    挑取單個菌落，進(jìn)行劃線分離。
    （二）實(shí)驗(yàn)程序2
    制平板
    吸取稀釋液
    取一吸管，以無菌操作法分別吸取10－4、10－5 、 10－6土壤稀釋液0.1mL，加在空培養(yǎng)皿中。
    混菌
    水平輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液、培養(yǎng)基充分混勻鋪平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
    計算出每克土壤中放線菌的數(shù)量。
    挑取單個菌落，進(jìn)行劃線分離。
    （三）實(shí)驗(yàn)程序3
    制成平板。
    凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的菌液一環(huán)（10－1）在平板上劃線。
    1、連續(xù)劃線法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面作連續(xù)劃線。完畢后，倒置于28～300C溫室培養(yǎng)。
    2、分區(qū)劃線法：用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，先在培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3—4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約600C角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次劃線會，同法依次作第三次和第四次劃線。劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。
    挑取單個菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，如果不純，再移植純化，最后得到純培養(yǎng)。