如何識(shí)破各種污染拯救細(xì)胞

當(dāng)您的課題進(jìn)行到白熱化程度時(shí)

卻發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被污染了

此時(shí)大家的心情可謂五味雜陳
 

形容一下就是

問君能有幾多愁，眼淚恰似一江春水向東流

不過，別擔(dān)心

逍鵬生物煉就火眼金睛

幫助大家識(shí)破各種污染，拯救您的細(xì)胞
 

我們先來看看污染的真面目，總結(jié)下來無(wú)非以下幾種類型：
 

 

我們一起來分析它們的特征：
 

1真菌-深藏不露
 

真菌之所以深藏不露，是因?yàn)樗鼈円话悴粫?huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基變渾濁，所以在污染早期，很難發(fā)現(xiàn)它們的蹤跡。直到長(zhǎng)到一定規(guī)模后在鏡下可觀察到分叉細(xì)絲狀的菌絲（有些呈管狀，樹枝狀，串珠狀的菌絲）（如圖1，圖2）。這類污染中，為首的污染代表是酵母菌：顯微鏡下常見成串的珠狀物，形態(tài)呈卵形，大約比細(xì)胞小5~10倍，當(dāng)其進(jìn)行出芽生殖時(shí)，會(huì)聚集成連體結(jié)構(gòu)；爆發(fā)污染嚴(yán)重時(shí)，會(huì)造成培養(yǎng)基pH值改變，不易除去。
 

圖1. 真菌污染                                                 圖2. 真菌污染
 

逍鵬生物可提供以下解決方案：
 

表1.產(chǎn)品列表

產(chǎn)品名稱-中文名稱	貨號(hào)	作用種類
兩性霉素B，250mg/ml	03-028-1B	真菌，酵母菌和霉菌
兩性霉素B，2500mg/ml	03-029-1B
制真霉素，10000units/ml	03-030-1C	真菌，酵母菌和霉菌
青鏈雙抗（青霉素-鏈霉素）	03-031-1B	對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌G+，革蘭氏陰毒性G-
青鏈雙抗（青霉素-鏈霉素）10X濃縮	03-031-5B
青鏈霉素，制真菌素三抗	03-032-1B	真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
青鏈霉素，兩性霉素B三抗	03-033-1B	真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
青鏈霉素，新霉素三抗	03-034-1B	真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
硫酸慶大霉素溶液，50mg/ml	03-035-1B	對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌，革蘭氏陰性菌，支原體
卡那霉素溶液，10mg/ml	03-049-1B	對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌，革蘭氏陰性菌，支原體

細(xì)菌-屢見不鮮
 

細(xì)菌種類繁多，分布廣泛，是最容易污染細(xì)胞的微生物。
 

細(xì)菌在顯微鏡下呈黑色細(xì)沙狀（如圖3），典型特征是，可以使培養(yǎng)基在短時(shí)間內(nèi)變成黃色或白色渾濁。細(xì)胞形態(tài)會(huì)出現(xiàn)多角，多核狀況；貼壁細(xì)胞不附著，停止生長(zhǎng)甚至死亡。
 

 

圖3. 細(xì)菌污染
 

逍鵬生物可提供以下解決方案如上表1：
 

3支原體-無(wú)孔不入
 

支原體之所以無(wú)孔不入是因?yàn)樗鼈兎N類繁多，常以寄生或腐生營(yíng)養(yǎng)方式生長(zhǎng)，廣泛存在于環(huán)境之中。
支原體是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的常見污染，經(jīng)常來源于實(shí)驗(yàn)人員（支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道）、動(dòng)物源血清及胰酶、消毒不完全的器具。其大小只有0.15~0.3μm，所以能通過一般標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)過濾方法，0.22μm過濾膜。其污染特征不是很明顯，增長(zhǎng)速度相較于細(xì)菌比較緩慢，污染初期（輕微）培養(yǎng)基可能依然清澈不會(huì)變黃，所以輕微污染時(shí)不容易用常規(guī)方法（細(xì)胞外觀觀察或是DNA染色法）確認(rèn)。

支原體會(huì)緩慢改變細(xì)胞形態(tài)、增殖、基因表達(dá)、蛋白合成及代謝反應(yīng)，它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌體實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

如下圖所示：
 

圖4. 支原體污染
 

逍鵬生物可提供：支原體檢測(cè)/處理/預(yù)防全套解決方案。
01. 即用型細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)PCR試劑盒
 

 

檢測(cè)結(jié)果如圖：
 

大家可自行根據(jù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。

02. 支原體處理試劑
 

03. 支原體預(yù)防噴霧
 

 

支原體檢測(cè)/處理/預(yù)防全套解決方案
 

表3. 產(chǎn)品列表
 

中文名稱	貨號(hào)	備注
支原體污染檢測(cè)試劑盒	20-700-20
支原體污染處理試劑	03-036-1B/C
	03-037-1B/C
	03-038-1B/C
支原體、細(xì)菌、真菌污染預(yù)防噴霧劑	IC-110100
支原體預(yù)防試劑	01-867-1B	100ml，有效消毒二氧化碳培養(yǎng)箱中的水盤
	01-916-1E	50ml，有效消毒任何形式的水浴環(huán)境

黑膠蟲-神秘莫測(cè)
 

黑膠蟲污染后，在鏡下可看到密密麻麻的小黑點(diǎn)在培養(yǎng)基中自主游動(dòng)。目前科學(xué)界對(duì)黑膠蟲的身份并無(wú)定論。Dr.Cell 目前檢測(cè)的黑膠蟲樣本，62%為細(xì)菌，38%為支原體。黑膠蟲在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等，具有細(xì)胞毒性，可引起細(xì)胞生長(zhǎng)遲緩或裂解凋亡。
 

點(diǎn)擊進(jìn)入公眾號(hào)查看黑膠蟲游動(dòng)視頻
 

逍鵬生物可提供以下解決方案：
 

使用三抗（貨號(hào)：03-032-1B）結(jié)合支原體處理試劑（貨號(hào)：03-036和03-037或03-038）有效清除實(shí)驗(yàn)室黑膠蟲污染。
 

5病毒-專一任性
 

病毒之所以“專一任性”是因?yàn)槠湮廴竞蛡鞑ゾ哂屑?xì)胞專一性，“鐘情”到一輩子吊死在一顆“樹”上。病毒污染可能來自宿主動(dòng)物細(xì)胞或病人，在細(xì)胞培養(yǎng)污染物中是相對(duì)最難檢測(cè)的。被病毒污染的細(xì)胞在顯微鏡下能明顯觀察到細(xì)胞碎片增多、腫大、圓縮、脫落等病態(tài)變形，嚴(yán)重時(shí)會(huì)在單層細(xì)胞上觀察到局部破損空斑（如圖5，圖6）。

 

    

   圖5. 感染之前                             圖6. 感染24小時(shí)后

逍鵬生物提供的解決方案：選用輻照血清以殺滅病毒。

細(xì)胞交叉污染-玉石難分
 

細(xì)胞交叉污染之所以“玉石難分”是因?yàn)槠溟L(zhǎng)相和實(shí)驗(yàn)所養(yǎng)的目的細(xì)胞形態(tài)相似，難以分辨。對(duì)于細(xì)胞株的交叉污染，曾有文獻(xiàn)報(bào)道統(tǒng)計(jì)，目前使用的細(xì)胞株大約有15~20%不是科學(xué)家們所認(rèn)為的細(xì)胞，而在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中，細(xì)胞來源和細(xì)胞株身份鑒定檢測(cè)的觀念是普遍缺乏的。
 

細(xì)胞株的交叉污染，常因不經(jīng)意的實(shí)驗(yàn)疏忽（不同細(xì)胞株分盤時(shí)，共享一瓶培養(yǎng)基；槍頭、移液管忘記更換，而造成不同細(xì)胞株之間的混合污染；實(shí)驗(yàn)操作人員錄入錯(cuò)誤細(xì)胞株名稱；傳代時(shí)的培養(yǎng)皿；冷凍細(xì)胞時(shí)的凍存管）而發(fā)生，繼而造成后續(xù)數(shù)據(jù)搜集錯(cuò)誤。
 

目前大部分的科學(xué)期刊都已有“細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)論文發(fā)表前，均需附上細(xì)胞鑒定報(bào)告”的規(guī)定（可查閱：文章發(fā)表前要求提供細(xì)胞鑒定的雜志），以此保證數(shù)據(jù)來源的正確性。
 

那么如何鑒別呢？細(xì)胞身份驗(yàn)證方式：短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）、同功酶分析、染色體組分型、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP）的特征分析等方法。其中STR，是目前國(guó)際細(xì)胞庫(kù)（包括：ATCC、DSMZ或是JCRB）常用于細(xì)胞株身份鑒定方法。
 

Dr.Cell可提供：（點(diǎn)擊名稱鏈接可進(jìn)入詳情頁(yè)）
 

1. 人源細(xì)胞系STR鑒定（STR Authentication）

2. 細(xì)胞物種鑒定（Species Identification）-15種常見模式動(dòng)物的鑒定
 

☆ 溫馨提示，至少每半年一次進(jìn)行細(xì)胞鑒定，理想情況每2-3個(gè)月鑒定一次，且課題開展前最好先確認(rèn)使用的細(xì)胞身份。
 

本期介紹就到這里啦

各位老師可以根據(jù)我們的方法進(jìn)行分析

如果您還是未找出問題所在

不要著急丟棄您的細(xì)胞們

歡迎關(guān)注逍鵬生物

我們有專業(yè)的人士可以為您答疑解惑

幫您搶救回來噢
 

注：本文中部分圖源和視頻來自百度搜索引擎和客戶提供。
 

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