白腹錦雞肌肉來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

                                                     白腹錦雞肌肉來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

名稱(chēng) 白腹錦雞肌肉來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一雌性白腹錦雞的肌肉組織。由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)于2015年建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS

傳代方法 1:2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR -
同工酶 無(wú)
染色體

運(yùn)輸和保存：
白腹錦雞肌肉來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

可以重發(fā)的情況有哪些？
（1）白腹錦雞肌肉來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）白腹錦雞肌肉來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)客戶(hù)造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細(xì)胞狀態(tài)不好，未細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

細(xì)胞特性：
1)】白腹錦雞肌肉來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白-18(CK-18)免疫熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍”，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。