細(xì)胞污染鑒別之支原體和黑膠蟲的預(yù)防與治療

細(xì)胞污染大展觀 - 支原體&黑膠蟲篇

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天氣漸熱

實驗人最頭疼的事情又來了

- 細(xì)胞污染 -

夏季是污染頻發(fā)的時間

那么如何判斷污染及預(yù)防污染呢？

今天我們一起來看看吧~

 

 

 

細(xì)胞污染可以分為四大類：細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染及黑膠蟲污染。

 

 

03

支 原 體 污 染

 

支原體污染特征：

◆ 增殖減慢

◆ 上清液清澈

◆ 背景干凈

◆ 細(xì)胞形態(tài)異常（拉絲、鋪展）

◆ 更換新的培養(yǎng)液，細(xì)胞狀態(tài)沒有恢復(fù)

 

示例1►

EBTr (牛胚氣管細(xì)胞)

感染支原體的EBTr (牛胚氣管細(xì)胞)（成纖維樣）

 

感染了支原體的EBTr：由成纖維樣逐漸變得類上皮樣；質(zhì)膜鋪展，潰爛；輪廓不清，邊界模糊；凋亡細(xì)胞過多。

示例2►

HT1080 (人纖維肉瘤細(xì)胞)

 

被支原體“附身”的HT1080

 

甩掉支原體的HT1080

 

被支原體污染的人纖維肉瘤細(xì)胞：由上皮樣逐漸變得類成纖維樣，胞體細(xì)長；偽足伸長，出現(xiàn)明顯的拉絲現(xiàn)象。

 

支原體檢測去除如何一步到位？

支原體檢測試劑：EZ-PCR法（主流方法）

 

該試劑盒可檢測到的14種支原體是：

M.fermentans（發(fā)酵支原體）， M.hyorhinis（豬鼻支原體）， M.arginini（精氨酸支原體）， M. Orale（口腔支原體）， M.Salivarium（唾液支原體）， M.hominis（人型支原體）， M.pulmonis（鼠肺支原體）， M.arthritidis（關(guān)節(jié)炎支原體），M.bovis（牛支原體）， M.pneumoniae（肺炎支原體），M.pirum（梨支原體）， M.capricolum（山羊支原體）， Acholeplasma （無膽甾原體），Spiroplasma species（螺原體）。

 

支原體殺除試劑：

BIOMYC-1

（03-036）

主要成分

太妙菌素

BIOMYC-2（03-037）

主要成分

二甲胺四環(huán)素

BIOMYC-3（03-038）

主要成分

環(huán)丙沙星

 

 

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）的使用方法：

1. 加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培養(yǎng)基中，保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng)4天，期間可用含 BIOMYC-1 的新培養(yǎng)基對細(xì)胞進行傳代；

2. 4天后，加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培養(yǎng)基中，并維持培養(yǎng)3天，期間可進行傳代。

3. 以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次處理周期。

4. 每過一個周期，細(xì)胞需要做支原體污染檢測，以確認(rèn)效果，從而適當(dāng)減少實驗過程。

 

方案二：BIOMYC-3（03-038）的使用方法：

1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培養(yǎng)基中；

2. 持續(xù)培養(yǎng)14天，期間可進行傳代;

3. 以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次處理周期。

4. 每過一個周期，細(xì)胞需要做支原體污染檢測，以確認(rèn)效果，從而適當(dāng)減少實驗過程。

 

提示：支原體殺除試劑對實驗幾乎沒有影響，可進行細(xì)胞實驗；如果用戶使用其中一種方案，不能根除支原體，說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內(nèi)；最佳方案是先用方案一處理一周期，再用方案二處理一周期，然后做支原體檢測。

 

 

 

04

黑 膠 蟲 污 染

 

黑膠蟲污染特點：

◆ 培養(yǎng)基不渾濁

◆ 復(fù)蘇或傳代時往往會出現(xiàn)黑膠蟲污染，并且與細(xì)胞呈現(xiàn)此消彼長的現(xiàn)象

 

黑膠蟲解決方案：

三抗(03-033)

青、鏈、兩性霉素

BIOMYC-1

（03-036）

主要成分

太妙菌素

BIOMYC-2（03-037）

主要成分

二甲胺四環(huán)素

BIOMYC-3（03-038）

主要成分

環(huán)丙沙星

 

 

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）和三抗（03-033）的使用方法：

1. 加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培養(yǎng)基中，保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng) 4 天。期間需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養(yǎng)基；

2. 4天后，加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培養(yǎng)基中，并維持培養(yǎng) 3 天；

3. 以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次如上處理循環(huán)。 

 

方案二：BIOMYC-3（03-038）和三抗（03-033）的使用方法：

1. 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培養(yǎng)基中；

2. 持續(xù)培養(yǎng)14天，期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基;

3. 以上是一個處理周期，必要時可繼續(xù) 2－3 次如上處理循環(huán)。

4. 在處理過程中，細(xì)胞需要做支原體污染檢測，以確認(rèn)效果，從而適當(dāng)減少實驗過程。 

 

友情提示：用戶選擇一種方案即可；最佳方案是，用戶先用方案一處理一周期，再用方案二處理一周期。如果用戶使用其中一種方案，不能根除黑膠蟲，說明該黑膠蟲可能在另一種方案的抑菌譜內(nèi)。

 

 

 

這么多污染如何進行預(yù)防呢？

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水浴鍋、水盤防菌試劑：

Aquaguard-1

（01-867）

主要成分

苯甲酸鈉

 

Aquaguard-2

 (01-916)

主要成分

2-溴代-2-硝基-1,3-丙二醇

Aquaguard-1

用來消毒培養(yǎng)箱中的水盤，可有效殺滅細(xì)菌、芽孢、支原體、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒；無毒；對不銹鋼無腐蝕性；不揮發(fā)。

用法：

1. 建議每兩周進行一次系統(tǒng)地清潔和消毒培養(yǎng)箱。

2. 稀釋100倍即可使用，即將1升水中加入10ml的Aquaguard-1溶液。

 

Aquaguard-2

用來消毒水浴鍋，可有效殺滅細(xì)菌、芽孢、支原體、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒。

用法：

1. 建議每周進行一次系統(tǒng)地清潔和消毒水浴鍋。

2. 稀釋500倍即可使用，即將1升水中加入2ml的Aquaguard-2溶液。

 

細(xì)胞培養(yǎng)箱防菌試劑：Pharmacidal （IC-110100）

主要成分：Pharmacidal 是由篩選過的有機氮化合物組成，主要組成成分為：芐基二甲基辛基氯化銨、芐索氯銨、氯化芐乙基銨、三羥乙基胺，并添加丙二醇等清潔消毒劑。

 

作用原理：Pharmacidal作用方式是使脂質(zhì)變性，分解細(xì)胞膜的雙層磷脂質(zhì)和增加細(xì)胞通透性，導(dǎo)致酶的滅活，蛋白質(zhì)沉淀，與DNA和RNA產(chǎn)生反應(yīng)。

 

特點：

1. Pharmacidal 對大部分的細(xì)菌、芽孢、支原體、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒都有效。

2. 不含汞、甲醛、苯酚和酒精，可生物降解、無毒、無刺激，對一般的工作臺面和器材沒有腐蝕性和任何損傷。

 

使用方法：可消毒橡膠手套、超凈臺面、桌面、顯微鏡臺、試劑瓶身等物體表面，噴涂完全濕潤，不需擦拭，自然風(fēng)干。

培養(yǎng)箱內(nèi)壁噴涂完全濕潤后，等待10分鐘后，用無菌吸水紙吸干內(nèi)壁上的殘留液體。

 

今天的介紹到這里就結(jié)束啦~
各位老師學(xué)會分辨這些污染了嗎？
如果還未學(xué)夠，那么快來參加我們的逍鵬大講堂吧~

 

 

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