293T細胞聚團或脫落怎么處理？

人胚腎細胞293T細胞是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株，廣泛用于病毒包裝。其有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來源都是人胚胎腎細胞，其極少表達細胞外配體所需的內(nèi)生受體，且比較容易轉染，是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。

人胚腎 293 (HEK 293) 細胞是生物技術和研究中常用的細胞系之一。由于 HEK 293 細胞具有較高的生長效率，通常生成用于生物醫(yī)學和藥物研究的外源性蛋白質。HEK 293細胞 也會被用于各種轉染實驗中。

細胞名稱：人胚腎細胞(STR鑒定正確)
細胞簡稱：293T
細胞別名：Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T;  293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
種屬來源：人
組織來源：胚腎
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S
傳代比例：1:4-1:8，每2-3天換液一次
傳代周期：24-48 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO₂，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存
質量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

293T細胞培養(yǎng)注意要點

1. 293T細胞為貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮樣。293T細胞貼壁能力較弱，容易脫壁，操作應該輕拿輕放。培養(yǎng)基及PBS均需預熱后使用。推薦復蘇或傳代時可使用提前用0.1%明膠包被過的培養(yǎng)瓶/皿，換液時，注意不要用力搖晃培養(yǎng)瓶/皿，培養(yǎng)基應沿培養(yǎng)瓶/皿壁緩慢加入，避免直接對著細胞吹打。

2. 293T細胞消化時間較短，0.25%胰酶消化時間為60s-90s。

3. 293T細胞生長速度很快，通常倍增時間不到24h，建議當細胞生長匯合度達到70-90%時進行傳代操作，避免過匯合，過匯合可能會導致細胞聚團。

該細胞因為貼壁松散，若購買常溫細胞，收貨時有可能大部分細胞脫離培養(yǎng)瓶壁，顯微鏡下找不到細胞，只能看到肉眼可見的細胞團，都是正�，F(xiàn)象。請參照以下方式處理：

1. 收到細胞后請先置于培養(yǎng)箱中穩(wěn)定2-4個小時后再進行下一步處理，不建議放置培養(yǎng)箱過夜后處理。
2. 將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉入無菌離心管，離心收集細胞（1100rpm，4min）。
3. 去掉上清，用PBS重懸細胞 (以手搖離心管的方式重懸，不要用移液槍吹)，將細胞收集到一個離心管中，再次離心(1200rpm, 3min)。
4. 去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸細胞 (還是以手搖離心管的方式混勻，不要吹細胞), 放入培養(yǎng)箱消化2分鐘。

5. 消化2分鐘后，加入5mL含血清的培養(yǎng)基混勻終止消化，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，離心 (1100rpm, 4min)。

6. 去掉上清，加入6mL左右的細胞相應的完全培養(yǎng)基混勻，視細胞量決定是1:2傳代還是1:3傳代 (由于細胞運輸有損傷，首次傳代建議比平時養(yǎng)密度稍高)。

7. 顯微鏡下觀察細胞是否有分散成單顆，若有明顯很大的細胞團需要重復上述步驟二次消化3~5個細胞的小團則不用干預，待細胞貼壁后再進行消化分散即可。

8. 第二天及時觀察細胞貼壁情況，若貼壁細胞量過多細胞堆積，請于貼壁24小時后再次傳代分瓶，若密度正常則繼續(xù)生長，不建議換液，貼壁48小時后換液去除不能貼壁的細胞。