HepG2培養(yǎng)常見問題匯總與解答

 

HepG2 /  細(xì)胞介紹

HepG2細(xì)胞是來源于一個(gè)15歲白人的肝癌組織；分泌多種血漿蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、轉(zhuǎn)鐵蛋白等；模式染色體數(shù)為55；該細(xì)胞在免疫抑制小鼠中不致瘤；是一個(gè)合適的轉(zhuǎn)染宿主；表達(dá)標(biāo)志物包括胰島素受體；胰島素樣生長因子II（IGF II）受體。

 

HepG2可以分泌多種血漿蛋白，主要用于肝癌的實(shí)驗(yàn)研究�？梢匝芯考�(xì)胞的增殖活性、凋亡能力、對藥物的反應(yīng)等情況，也可以將HepG2細(xì)胞種植在小白鼠或大鼠的體內(nèi)形成人工的肝細(xì)胞癌，之后用藥物來治療這種人工的肝細(xì)胞癌，觀察用藥治療的效果。

 

名稱	HepG2（人肝癌細(xì)胞）
形態(tài)	上皮樣
生長特性	貼壁；傳代比例 1:4 -1:6
營養(yǎng)體系	MEM(C3050-0500) + 10% FBS(C04002)

HepG2

人肝癌細(xì)胞

 

 

HepG2 /  細(xì)胞復(fù)蘇

1. 配制完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+胎牛血清+雙抗（特殊培養(yǎng)基特殊配置）；

2. 細(xì)胞復(fù)蘇：取5ml完全培養(yǎng)基于15ml離心管中，37℃水浴鍋預(yù)熱，從液氮罐（或者-80℃冰箱）中快速取出凍存的細(xì)胞，放入37℃水浴鍋中，搖晃使快速化凍（1min左右），然后將化凍的細(xì)胞和預(yù)熱的培養(yǎng)基，移入超凈工作臺中，化凍的細(xì)胞加入到含預(yù)熱培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3. 吸棄上清，得到細(xì)胞沉淀，用2ml完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，加入到T25培養(yǎng)瓶中，做好標(biāo)記，放入37℃，5%CO₂飽和適度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)皿復(fù)蘇效果更好）；

4. 24h后，觀察細(xì)胞貼壁情況（未貼壁的即為死細(xì)胞--針對貼壁細(xì)胞），吸棄舊培養(yǎng)基，加入新鮮的預(yù)熱（室溫或37℃）的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

 

 

HepG2 /  細(xì)胞傳代

細(xì)胞一般是3、4天傳代一次。若是長時(shí)間該換液不換液或者不傳代也換液就容易導(dǎo)致細(xì)胞漂浮死亡吸去培養(yǎng)液。用PBS輕微沖洗一遍，加入不含EDTA的0.25%胰酶，放置在37℃的培養(yǎng)箱中，2分鐘，即可輕松吹打下來。再放入1.5ml錐型離心管中，800轉(zhuǎn)每分鐘，離心3分鐘，目的是除去細(xì)胞碎片等其他雜質(zhì)，使細(xì)胞更加干凈。后將離心管中上清液吸出，只留下沉淀，再加入新鮮的完全培養(yǎng)基，吹打均勻后加入到細(xì)胞瓶中或者平皿中。

 

 

HepG2 /  細(xì)胞凍存

1. 90%血清+10%細(xì)胞培養(yǎng)級別的DMSO，先放入凍存盒中12小時(shí)至24小時(shí)。

2. 后轉(zhuǎn)移到液氮當(dāng)中。如沒有凍存盒，則需要將細(xì)胞放入4℃冰箱中12小時(shí)左右。

3. 再轉(zhuǎn)移至-20℃12小時(shí)左右，再轉(zhuǎn)移到-80℃后12小時(shí)左右，最后放入液氮。

 

 

HepG2

細(xì)胞狀態(tài)好的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)有哪些？

細(xì)胞狀態(tài)好的特點(diǎn)：細(xì)胞克隆成島狀，背景干凈

 

 

HepG2

傳代時(shí)，怎樣才能使HepG2消化成單個(gè)細(xì)胞？

長勢良好的HepG2

 

原因推斷：HepG2在體外培養(yǎng)時(shí)容易聚團(tuán)呈島狀，且如果長得過滿，輕度消化就成片下來，容易成團(tuán)。

 

解決辦法：

1. 融合率達(dá)到80%即可傳代，長太滿容易成片脫落。

2. 先用胰酶消化約3分鐘，用完培終止消化作用，然后用移液管將細(xì)胞懸液吸起，將管口稍微用力按在培養(yǎng)瓶底部，用力快速將細(xì)胞懸液擠出（可重復(fù)一次），可有效減輕細(xì)胞聚團(tuán)。

 

 

HepG2

細(xì)胞主要用于哪些實(shí)驗(yàn)研究？

肝炎病毒研究：HepG2是常用的研究HBV和HCV細(xì)胞系模型，利用CRISPR/Cas9構(gòu)建基因敲除HepG2的HBV感染細(xì)胞模型細(xì)胞，為徹底治愈乙肝提供新思路。

 

體外肝癌（HCC）模型：HepG2中p53抑癌基因無突變，因此可用于研究p53與肝細(xì)胞癌（HCC）的密切關(guān)系，以及HCC的發(fā)病、診治、預(yù)防。

 

藥物研究：肝臟是人體內(nèi)藥物代謝的最主要器官，也是重要的解毒器官。HepG2細(xì)胞系無論在形態(tài)上還是功能上都更接近于人的肝組織，該細(xì)胞系常用于藥物代謝和肝毒性研究。

 

 

注：本文部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，僅做學(xué)習(xí)參考使用。

 

 

 

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