293無(wú)血清培養(yǎng)基FH-293F培養(yǎng)說(shuō)明書
293 無(wú)血清培養(yǎng)基 FH-293F
產(chǎn)品描述：
293 無(wú)血清培養(yǎng)基適用于懸浮培養(yǎng)條件下的 HEK293 細(xì)胞(如 293-F,293-T,Expi-293F 等) 高密度生長(zhǎng)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)。 培養(yǎng)基含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的全部營(yíng)養(yǎng)成份， 無(wú)需 添加任何添加即可使用。(注意： 此培養(yǎng)基不包含抗生素以及血清)
產(chǎn)品特點(diǎn):
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染專用培養(yǎng)基， 適用于 HEK293 細(xì)胞高密度懸浮培養(yǎng)無(wú)蛋白、無(wú)動(dòng)物源、化學(xué)成分限定即用型完全培養(yǎng)基,無(wú)需添加額外成分
基礎(chǔ)參數(shù)：
產(chǎn)品使用方法：
細(xì)胞馴化
1)直接馴化
大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細(xì)胞， 可以直接適應(yīng) FH-293F ，只要按照日常傳代方 式(稀釋)更換培養(yǎng)基即可。
產(chǎn)品描述：
293 無(wú)血清培養(yǎng)基適用于懸浮培養(yǎng)條件下的 HEK293 細(xì)胞(如 293-F,293-T,Expi-293F 等) 高密度生長(zhǎng)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)。 培養(yǎng)基含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的全部營(yíng)養(yǎng)成份， 無(wú)需 添加任何添加即可使用。(注意： 此培養(yǎng)基不包含抗生素以及血清)
產(chǎn)品特點(diǎn):
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染專用培養(yǎng)基， 適用于 HEK293 細(xì)胞高密度懸浮培養(yǎng)無(wú)蛋白、無(wú)動(dòng)物源、化學(xué)成分限定即用型完全培養(yǎng)基,無(wú)需添加額外成分
基礎(chǔ)參數(shù)：
| 外觀： | 澄清透明紅色液體 |
| 滲透壓： | 275±15 mOSM |
| pH: | 6.9-7.4 |
| 無(wú)菌檢測(cè): | 無(wú)菌 |
| 內(nèi)毒素： | <5 EU/mL |
| 儲(chǔ)存條件： | 2-8℃，避光 |
| 效期： | 12 個(gè)月 |
| 產(chǎn)品用途： | 僅用于科學(xué)研究，不適用于人類或動(dòng)物的診斷和治療 |
產(chǎn)品使用方法：
細(xì)胞馴化
1)直接馴化
大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細(xì)胞， 可以直接適應(yīng) FH-293F ，只要按照日常傳代方 式(稀釋)更換培養(yǎng)基即可。
2)漸進(jìn)式馴化
注意：選用低代次、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行馴化
① 原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代 2 到 3 次至細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)
到 2x10 6 cells/ml 后進(jìn)行傳代，傳代細(xì)胞密度控制在 0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10% 血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無(wú)血清培養(yǎng)基與 FH-293F 的比例為 75:25；
②將細(xì)胞置于 37℃， 5% CO2，轉(zhuǎn)速為 110-175 rpm 的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；
③當(dāng)細(xì)胞密度 3-4 天后達(dá)到 3x10 6 cells/ml 且細(xì)胞活率>90%，傳代時(shí) 5-10%血清的傳統(tǒng)培
養(yǎng)基或其他無(wú)血清培養(yǎng)基與 293培養(yǎng)基 的比例為 50:50，細(xì)胞密度控制在 0.5×10 6 cells/ mL。如細(xì)胞生長(zhǎng)慢，可離心上清， 留 20%條件培養(yǎng)基，加入 80%的 5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其 他無(wú)血
清培養(yǎng)基與 FH-293F 培養(yǎng)基 比例為 75:25 的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；④重復(fù)步驟
③逐步增加FH-293F 所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無(wú)血清培養(yǎng)基與 FH-293F 的比例為 25:75 至 10:90)直到 100%的 UP1000 無(wú)血清培養(yǎng)基；
⑤經(jīng)過(guò)在 100%的 FH-293F 無(wú)血清培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)， 傳代后 3-4 天細(xì)胞的密度可以達(dá) 到 2-3×10 6 cells/mL，細(xì)胞活率大于 90%，這說(shuō)明細(xì)胞已經(jīng)完全適應(yīng)了FH-293F 無(wú)血清培養(yǎng)基。 之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的起始密度可以降到 0.3×10 6 cells/mL，一般傳代 2-3 次后 再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
注意: 一般細(xì)胞馴化過(guò)程中，前三代細(xì)胞的狀態(tài)可能不是很好，但一般從第四代狀態(tài)會(huì)有改 善。
細(xì)胞傳代
1)取細(xì)胞培養(yǎng)樣品，人工或儀器測(cè)定細(xì)胞密度以及活率；
2)計(jì)算傳代所需的細(xì)胞用量，建議起始細(xì)胞密度為 0.2-0.4×10 6 cells/mL。建議復(fù)蘇的 細(xì)胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議為 15-20 mL(100 mL 的培養(yǎng)瓶)或 50-60 mL (250 mL 的培養(yǎng)瓶)；
3)將細(xì)胞置于 37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為 110-175 rpm 的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)，3-4 天傳代一次。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染在 FH-293F 無(wú)血清培養(yǎng)基中， 采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑(例如 Gibco 293Fectin™ ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit ) 可以實(shí)現(xiàn)對(duì) HEK293 細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。
注意：選用低代次、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行馴化
① 原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代 2 到 3 次至細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)
到 2x10 6 cells/ml 后進(jìn)行傳代，傳代細(xì)胞密度控制在 0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10% 血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無(wú)血清培養(yǎng)基與 FH-293F 的比例為 75:25；
②將細(xì)胞置于 37℃， 5% CO2，轉(zhuǎn)速為 110-175 rpm 的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；
③當(dāng)細(xì)胞密度 3-4 天后達(dá)到 3x10 6 cells/ml 且細(xì)胞活率>90%，傳代時(shí) 5-10%血清的傳統(tǒng)培
養(yǎng)基或其他無(wú)血清培養(yǎng)基與 293培養(yǎng)基 的比例為 50:50，細(xì)胞密度控制在 0.5×10 6 cells/ mL。如細(xì)胞生長(zhǎng)慢，可離心上清， 留 20%條件培養(yǎng)基，加入 80%的 5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其 他無(wú)血
清培養(yǎng)基與 FH-293F 培養(yǎng)基 比例為 75:25 的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；④重復(fù)步驟
③逐步增加FH-293F 所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無(wú)血清培養(yǎng)基與 FH-293F 的比例為 25:75 至 10:90)直到 100%的 UP1000 無(wú)血清培養(yǎng)基；
⑤經(jīng)過(guò)在 100%的 FH-293F 無(wú)血清培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)， 傳代后 3-4 天細(xì)胞的密度可以達(dá) 到 2-3×10 6 cells/mL，細(xì)胞活率大于 90%，這說(shuō)明細(xì)胞已經(jīng)完全適應(yīng)了FH-293F 無(wú)血清培養(yǎng)基。 之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的起始密度可以降到 0.3×10 6 cells/mL，一般傳代 2-3 次后 再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
注意: 一般細(xì)胞馴化過(guò)程中，前三代細(xì)胞的狀態(tài)可能不是很好，但一般從第四代狀態(tài)會(huì)有改 善。
細(xì)胞傳代
1)取細(xì)胞培養(yǎng)樣品，人工或儀器測(cè)定細(xì)胞密度以及活率；
2)計(jì)算傳代所需的細(xì)胞用量，建議起始細(xì)胞密度為 0.2-0.4×10 6 cells/mL。建議復(fù)蘇的 細(xì)胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議為 15-20 mL(100 mL 的培養(yǎng)瓶)或 50-60 mL (250 mL 的培養(yǎng)瓶)；
3)將細(xì)胞置于 37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為 110-175 rpm 的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)，3-4 天傳代一次。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染在 FH-293F 無(wú)血清培養(yǎng)基中， 采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑(例如 Gibco 293Fectin™ ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit ) 可以實(shí)現(xiàn)對(duì) HEK293 細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞復(fù)蘇
1) 迅速取出凍存的細(xì)胞，在 37℃水浴條件下進(jìn)行解凍(可以在水中輕輕晃動(dòng)，時(shí)間控制在 60s 以內(nèi))；
2)輕輕地混勻細(xì)胞并將融化的細(xì)胞全部移至 15ml 無(wú)菌離心管中，逐滴加入 10ml 預(yù)熱到 37℃ 的培養(yǎng)基，離心換液(100g，5min) 去除全部上清，加入新鮮培養(yǎng)基重懸，使得細(xì)胞密度達(dá)到 0.4-0.66cells/ml；
3)將細(xì)胞置于 37℃， 5%CO2，轉(zhuǎn)速為 110-175rpm 的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；
4) 2-4 天后通過(guò)人工或儀器測(cè)定細(xì)胞的密度及活率， 如果細(xì)胞密度達(dá)到 1.0*106cells/ml， 活率達(dá)到 85%以上則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；
5) 如果細(xì)胞密度低于 1.0*106cells/ml，則建議對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心(100g，5min)，然后重懸 于 20-30ml 的新鮮培養(yǎng)基中使得細(xì)胞密度為 0.4-0.6*106cells/ml 左右，并繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞正常 生長(zhǎng)則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1) 凍存細(xì)胞時(shí)，要選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期同期細(xì)胞活率在 90%以上的HEK293cells；
2) 事先計(jì)算好凍存的細(xì)胞管數(shù)和所用的培養(yǎng)基的體積；
3)制備細(xì)胞凍存液：用C7001無(wú)血清凍存液凍存
4) 對(duì)細(xì)胞樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)；
5) 取樣計(jì)數(shù)， 以 100g，3-5min 的條件離心收集細(xì)胞， 然后用凍存培養(yǎng)基(4℃) 重懸細(xì)胞， 使得細(xì)胞密度為 5-10*106cells/ml；
6)取樣計(jì)數(shù)， 調(diào)整細(xì)胞密度；迅速分裝細(xì)胞到無(wú)菌的凍存管中， 一般 2ml 的凍存管 1-1.5ml， 貼好標(biāo)簽，密封；
7) 將細(xì)胞凍存管放到置于-80℃冰箱，過(guò)夜存放后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中進(jìn)行保存。
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