科普知識：血管生成實驗前必須學(xué)會的小常識

瀏覽次數(shù)：377　發(fā)布日期：2023-2-1　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

開始實驗前要問的問題!

我應(yīng)該使用哪種內(nèi)皮細(xì)胞？

內(nèi)皮細(xì)胞具有高度器官和組織特異性。由于這種異質(zhì)性，不同內(nèi)皮細(xì)胞類型的管形成時間不同。在計劃實驗時必須考慮到這一點。通常，低傳代人臍靜脈細(xì)胞 (HUVEC) 用于管形成測定。

可以應(yīng)用的細(xì)胞類型的更多例子是：

原代牛主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 (BAOEC)
豬骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞 (EPC)
人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HAEC)
人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HPAEC)
人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HCAEC)

哪種細(xì)胞密度最適合我的實驗？

確定正確的細(xì)胞數(shù)對于從管形成測定中獲得最佳結(jié)果至關(guān)重要。細(xì)胞密度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞大小。在開始實際實驗之前，我們建議在非抑制條件下播種多個細(xì)胞并對管形成進(jìn)行成像。創(chuàng)建的管數(shù)最多的細(xì)胞密度將顯示出最明顯的物質(zhì)效應(yīng)，因此應(yīng)該用于實驗。請記住，細(xì)胞通常不會在凝膠基質(zhì)上增殖。通常，我們建議每孔使用 5,000–10,000 個 HUVEC。

我應(yīng)該使用哪種基質(zhì)膠？

內(nèi)皮細(xì)胞的管形成率取決于形成基底膜樣細(xì)胞外基質(zhì) (ECM) 表面的凝膠的類型和成分，細(xì)胞在該表面上接種。市售有幾種基底膜提取物，例如 Matrigel® 和 Cultrex®，它們均由 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤細(xì)胞分泌。在開始使用特定內(nèi)皮細(xì)胞類型進(jìn)行實驗之前，我們建議測試幾種基底膜物質(zhì)并遵循已發(fā)布的說明。如果將在您的測定中測試促血管生成劑，則應(yīng)使用減少生長因子的凝膠基質(zhì)。此外，如果可能，在整個實驗中使用同一批次。

實驗中應(yīng)包括哪些對照？

為了對您的結(jié)果進(jìn)行正確的統(tǒng)計分析，包括陽性和陰性對照非常重要。作為陽性對照，在不使用任何抑制劑的情況下對您感興趣的細(xì)胞系進(jìn)行管形成測定。當(dāng)在生長因子減少的 Matrigel® 上用饑餓培養(yǎng)基培養(yǎng)時，內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)在數(shù)小時內(nèi)顯示管的形成。作為陰性對照，可以使用不影響細(xì)胞活力的管形成抑制劑。

我的移液器工作準(zhǔn)確嗎？它們是否經(jīng)常校準(zhǔn)？

為避免在使用 µ-Slide 15 Well 3D 時形成凝膠基質(zhì)的半月板，將 10 µl 的精確量移液至內(nèi)孔至關(guān)重要。此外，正確細(xì)胞數(shù)的播種非常重要。因此，有必要使用經(jīng)過校準(zhǔn)且處于完美工作狀態(tài)的移液器。我們建議用相應(yīng)的凝膠潤濕移液管尖端，然后使用這一尖端填充孔。

康寧Lambda EliteTouch移液器經(jīng)過精心設(shè)計，可提供最高水平的舒適性，準(zhǔn)確性和精確度。輕巧的結(jié)構(gòu)，輪廓處理的手柄和4位數(shù)的計數(shù)器旨在確保舒適的移液，可提供試用。

血管生成載玻片刨面圖

我應(yīng)該在哪個時間范圍內(nèi)觀察細(xì)胞？

管形成的持續(xù)時間取決于細(xì)胞類型和所使用的細(xì)胞外基質(zhì)，應(yīng)單獨確定。通常，HUVEC 在 2-4 小時后已經(jīng)形成管。24 小時后，細(xì)胞開始發(fā)生凋亡，這會導(dǎo)致與基質(zhì)的分離和管子的破裂。

抑制劑隨時間對管形成的影響。

我應(yīng)該手動還是自動監(jiān)控管的形成？

如果有活細(xì)胞成像設(shè)備，我們建議使用延時視頻成像——尤其是在您不熟悉所用細(xì)胞類型的血管生成行為的情況下。在典型設(shè)置中，系統(tǒng)會在 24 小時內(nèi)每 5-15 分鐘自動拍攝一張照片。這使得能夠精確監(jiān)測管形成的進(jìn)程，例如，在添加特殊物質(zhì)之后。如果您已經(jīng)知道管形成的大致時間范圍，也可以在預(yù)期的感興趣時間點手動拍照。