THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過程中貼壁、聚團、復(fù)蘇問題分析及解決方法

最近好多小伙伴咨詢 THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)各種難題，問的最多的還是貼壁問題。通過經(jīng)驗總結(jié)和資料查詢，今天給大家出一份培養(yǎng)攻略，希望幫到大家。

先做一個簡短介紹：THP-1 細(xì)胞系最初來自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液，屬于懸浮細(xì)胞，有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力，是各領(lǐng)域研究常用的細(xì)胞系之一。

表1 THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）細(xì)胞基本信息

圖2 THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

THP-1單核細(xì)胞正常形態(tài)為懸浮的體積較小、透亮的圓形細(xì)胞，少數(shù)聚團成葡萄狀，粒粒飽滿，輪廓清晰（如圖3）。該細(xì)胞在偏酸性環(huán)境中，生長更快，所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時，是比較適合細(xì)胞生長的，此時補液或半換液即可；開啟后的1640培養(yǎng)基，長期放置pH會偏高，建議開封后一周內(nèi)使用完畢。該細(xì)胞對血清要求高，血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
 

圖3 狀態(tài)良好的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

首先，我們要討論的是THP-1貼壁問題。THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況（如圖4），不需要擔(dān)心�？梢暂p吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞。但如果當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常，這時候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常�？捎梅荰C處理過的培養(yǎng)瓶，不利于細(xì)胞貼壁。
 

圖4 部分貼壁的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

然后我們要討論的是THP-1聚團問題（如圖5所示）。THP-1細(xì)胞在密度較稀時，有少量細(xì)胞聚團屬于正�，F(xiàn)象，不建議將聚團的細(xì)胞吹散，等待密度高時，細(xì)胞會自然分散開。當(dāng)細(xì)胞密度高時，聚團細(xì)胞比例高于30%時，并且細(xì)胞團呈糜爛狀，細(xì)胞之間界限不清，胞體質(zhì)膜有潰爛感，這種情況下的細(xì)胞聚團是異常的。若對細(xì)胞沒有做過任何實驗處理，可優(yōu)先排查營養(yǎng)體系，比如更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。
 

圖5 嚴(yán)重聚團的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

最后我們要討論的是關(guān)于THP-1復(fù)蘇不起來怎么辦？（如圖6所示）該細(xì)胞對凍存密度有依賴，凍存密度建議5*106-107/ml；同時復(fù)蘇密度也有依賴性，建議不低于3*106/ml。當(dāng)細(xì)胞傳過幾次代，狀態(tài)較好時，傳代密度維持在5*105/ml-106/ml為宜，超過2*106/ml則需要傳代。如有細(xì)胞碎片，待細(xì)胞密度增大后通過低速離心去除。
 

圖6 復(fù)蘇狀態(tài)很差的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

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